[发明专利]亚热带森林土壤纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法

权利要求书

1.亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于：以对硝基苯纤维二糖苷为底物，称取土壤与底物水浴反应后，采用多功能酶标仪进行测定。

2.如权利要求1所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于由以下步骤组成：

用40mM-60mM醋酸钠缓冲液将对硝基苯纤维二糖苷配制成浓度为1.0mM－1.5mM的底物溶液，所述醋酸钠缓冲液pH为4.5－5.0；

吸取140μL－160μL步骤（1）制得的底物溶液于EP管中，称取0.04g-0.06g土壤样品加入其中，充分混匀后置于40℃－50℃恒温条件下水浴，反应60min-90min；反应结束后加入0.1mL 0.4M-0.5M NaCO₃溶液终止反应；

步骤（2）反应后的溶液置于离心机中4000r/min－5000r/min条件下离心5min－8min；

（4）吸取100μL步骤（3）的上清液，用多功能酶标仪测定OD400nm－OD420nm处光吸收值；

通过标准曲线推定亚热带森林土壤中外切纤维二糖水解酶的活性。

3.如权利要求2所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于：所述步骤（1）为用50mM醋酸钠缓冲液将对硝基苯纤维二糖苷配制成浓度为1.2mM的底物溶液，所述醋酸钠缓冲液pH为5.0。

4.如权利要求2所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于：所述步骤（2）为吸取160μL步骤（1）制得的底物溶液于EP管中，称取0.06g土壤样品加入其中，充分混匀后置于40℃恒温条件下水浴，反应90min；反应结束后加入0.1mL 0.5M NaCO₃溶液终止反应。

5.如权利要求2所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于：所述步骤（3）为步骤（2）反应后的溶液置于离心机中5000r/min条件下离心5min。

6.如权利要求2所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于：所述步骤（4）为吸取100μL步骤（3）的上清液，用多功能酶标仪测定OD400nm处光吸收值。

7.如权利要求1或2所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于对照样品的制备方法为：吸取140μL－160μL用pH为4.5－5.0浓度为40mM-60mM醋酸钠缓冲液配制的1.0mM－1.5mM 对硝基苯纤维二糖苷溶液于EP管中，40℃－50℃恒温条件下水浴60min－90min，之后加入0.1mL 0.4M-0.5M NaCO₃溶液，最后称取0.04g-0.06g土壤样品加入上述反应液中，混匀后置离心机中4000r/min－5000r/min条件下离心5min-8min，吸取100μL上清液用多功能酶标仪测定OD400nm－OD420nm处光吸收值。

8.如权利要求7所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于对照样品的制备方法为：吸取160μL用pH为5.0浓度为50mM醋酸钠缓冲液配制的1.2mM 对硝基苯纤维二糖苷溶液于EP管中，40℃恒温条件下水浴90min，之后加入0.1mL 0.5M NaCO₃溶液，最后称取0.06g土壤样品加入上述反应液中，混匀后置离心机中5000r/min条件下离心5min，吸取100μL上清液用多功能酶标仪测定OD400nm处光吸收值。

9.如权利要求1或2所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于对硝基苯酚标准曲线测定方法为：分别取0μL、10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL 1mM的对硝基苯酚标准液加入EP管中，用pH为4.5－5.0的40mM-60mM醋酸钠缓冲液补齐至180μL-220μL，然后加入0.1mL0.4M-0.5M NaCO₃溶液，吸取100μL上清液用多功能酶标仪测定OD400nm－OD420nm处光吸收值，绘制标准曲线。

10.如权利要求9所述的亚热带森林土壤中纤维二糖水解酶Ⅰ活性的测定方法，其特征在于对硝基苯酚标准曲线测定方法为：分别取0μL、10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL 1mM的对硝基苯酚标准液加入EP管中，用pH为5.0的50mM醋酸钠缓冲液补齐至220μL，然后加入0.1mL 0.5M NaCO₃溶液，吸取100μL上清液用多功能酶标仪测定OD400nm处光吸收值，绘制标准曲线。