[发明专利]弧菌检测引物组及检测方法

权利要求书

1.检测弧菌的引物组，其特征在于：包括以下一对或多对引物：

toxR基因引物对：

上游引物toxR-F序列为：TGCAAGTAAAGATCCTGATG，即序列表SEQIDNo.1；

下游引物toxR-R序列为：GTCGTAAACAAAATGACACAA，即序列表SEQIDNo.2；

flaA基因引物对：

上游引物flaA-F序列为：TTACGCAGAAGCGGTGAT，即序列表SEQIDNo.3；

下游引物flaA-R序列为：GCTGTTGGATGAAGGGTC，即序列表SEQIDNo.4；

pyrH基因引物对：

上游引物pyrH-F序列为：AAAGAACTGGTTGAACTGGGTG，即序列表SEQIDNo.5；

下游引物pyrH-R序列为：CCATCAACTTTCGTCGCTTT，即序列表SEQIDNo.6。

2.一种检测弧菌的方法，其特征在于：所述方法包括使用以下一对或多对引物对模板进行PCR扩增的步骤：

toxR基因引物对：

上游引物toxR-F序列为：TGCAAGTAAAGATCCTGATG，即序列表SEQIDNo.1；

下游引物toxR-R序列为：GTCGTAAACAAAATGACACAA，即序列表SEQIDNo.2；

flaA基因引物对：

上游引物flaA-F序列为：TTACGCAGAAGCGGTGAT，即序列表SEQIDNo.3；

下游引物flaA-R序列为：GCTGTTGGATGAAGGGTC，即序列表SEQIDNo.4；

pyrH基因引物对：

上游引物pyrH-F序列为：AAAGAACTGGTTGAACTGGGTG，即序列表SEQIDNo.5；

下游引物pyrH-R序列为：CCATCAACTTTCGTCGCTTT，即序列表SEQIDNo.6。

3.如权利要求2所述的检测弧菌的方法，其特征在于：所述PCR扩增的退火温度为54-56℃。

4.如权利要求3所述的检测弧菌的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应程序为：94-95℃预变性5min；94-95℃变性30s，54-56℃退火30s，72℃延伸30-75s，35个循环；72℃反应5min。

5.如权利要求2至4任一项权利要求所述的检测弧菌的方法，其特征在于：所述模板的制备方法为：将待测细菌样本35-38℃下振荡培养12-24h后所得菌液离心，收集菌体并用150μL无菌水稀释即得模板。

6.如权利要求5所述的检测弧菌的方法，其特征在于：所述培养采用LB液体培养基。

7.如权利要求5所述的检测弧菌的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系为25μL的反应体系，其包括：PCR缓冲液2-3μL，10mmol/L的dNTP2μL，DNA聚合酶0.2-0.4μL，上游引物、下游引物各0.8-1μL，模板0.8-1μL，无菌水余量。

8.如权利要求7所述的检测弧菌的方法，其特征在于：所述上游引物、下游引物的浓度均为9-11μmol/L。