[发明专利]弧菌检测引物组及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，特别涉及一种弧菌检测引物组及检测方法。

背景技术

弧菌是一类广泛分布于海洋环境的嗜盐性革兰氏阴性杆菌，隶属弧菌科，弧菌属，具有丰富的多样性。现在有10多种是水产养殖中的病原菌，包括河流弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌等。河流弧菌、鳗弧菌和溶藻弧菌均为条件致病菌，当水产养殖动物在不良的环境条件下，遭遇不利刺激或是受伤时，会诱发疾病的产生。

随着人工养殖迅速发展，养殖水域生态变化，弧菌病已经成为海水养殖动物主要的细菌性病害之一。具有流行广、发病率高、危害大、死亡率高等特点，给鱼、虾、蟹及贝类等海水动物的养殖造成了巨大的影响。有研究表明：当水中弧菌的数量为10³-10⁴cfu/mL时对虾的红腿病症状明显加重，cfu/mL即每毫升样品中含有的细菌群落总数。河流弧菌、鳗孤菌和溶藻弧菌能引起世界范围内的50多种淡海水养殖鱼类及其它养殖动物发生弧菌病。很多研究表明，这三种弧菌是多种养殖对虾感染发病的重要原因。可以引起对虾红腿、黄鳃、断须、额剑和尾部溃烂；对外界反应迟钝；部分虾体发黑和肌肉白浊。河弧菌肠、溶藻弧菌还能使人治病，引起散发性腹泻。对弧菌引起的疾病的防治主要采取“预防为主、重点监测、防治结合”的综合措施，有效地检测弧菌的方法将为弧菌的预防提供基本保障。

PCR检测法是检测弧菌的有效方法之一，但由于目前PCR检测的特异性不够，对弧菌的检测容易受到不同致病菌或其他因素的干扰，容易产生非特异性扩增，更加无法对多种弧菌进行同时检测，且检测灵敏度有限，当弧菌含量较低时无法及时检测出来，造成检测效率偏低、准确性不够。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种特异性强、灵敏度高的弧菌检测引物组及检测方法。

本发明第一方面提供了检测弧菌的引物组，包括以下一对或多对引物：

toxR基因引物对：

上游引物toxR-F序列为：TGCAAGTAAAGATCCTGATG，即序列表SEQIDNo.1；

下游引物toxR-R序列为：GTCGTAAACAAAATGACACAA，即序列表SEQIDNo.2；

flaA基因引物对：

上游引物flaA-F序列为：TTACGCAGAAGCGGTGAT，即序列表SEQIDNo.3；

下游引物flaA-R序列为：GCTGTTGGATGAAGGGTC，即序列表SEQIDNo.4；

pyrH基因引物对：

上游引物pyrH-F序列为：AAAGAACTGGTTGAACTGGGTG，即序列表SEQIDNo.5；

下游引物pyrH-R序列为：CCATCAACTTTCGTCGCTTT，即序列表SEQIDNo.6。

本发明第二方面提供了一种检测弧菌的方法，所述方法包括使用以下一对或多对引物对模板进行PCR扩增的步骤：

toxR基因引物对：

上游引物toxR-F序列为：TGCAAGTAAAGATCCTGATG，即序列表SEQIDNo.1；

下游引物toxR-R序列为：GTCGTAAACAAAATGACACAA，即序列表SEQIDNo.2；

flaA基因引物对：

上游引物flaA-F序列为：TTACGCAGAAGCGGTGAT，即序列表SEQIDNo.3；

下游引物flaA-R序列为：GCTGTTGGATGAAGGGTC，即序列表SEQIDNo.4；

pyrH基因引物对：

上游引物pyrH-F序列为：AAAGAACTGGTTGAACTGGGTG，即序列表SEQIDNo.5；

下游引物pyrH-R序列为：CCATCAACTTTCGTCGCTTT，即序列表SEQIDNo.6。