[发明专利]一种大孔改性蛋清细胞培养支架材料的制备方法

权利要求书

1.一种大孔改性蛋清细胞培养支架材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）配制质量百分比浓度为20%的P(MVE-alt-MAH)水溶液， 取0.025~0.2g的P(MVE-alt-MAH)水溶液加入反应器皿中；

（2）取质量百分比浓度为10%的碳酸氢钠溶液，缓慢滴加到P(MVE-alt-MAH)水溶液中，调节pH为5-6，反应10-15 min；加入1-乙基-（3-甲基氨基丙基）碳酰二亚胺活化15-20 min；再加N-羟基琥珀酰亚胺反应15-20 min；1-乙基-（3-甲基氨基丙基）碳酰二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1；

（3）调节pH7.2，再加入2 mL鸡蛋清进行交联，充分振荡或搅拌后静置，25~37℃下充分交联反应完全；

（4）将步骤（3）得到的大孔改性蛋清细胞培养支架材料用注射器逐滴滴入PBS溶液，静止12 h，使其中的多余小分子脲吸出去除，重复若干次；

（5）将步骤（4）得到的大孔改性蛋清细胞培养支架材料置于细胞超净工作台，紫外照射杀菌即获得用于细胞培养的大孔改性蛋清培养支架材料。

2.根据权利要求1所述的大孔改性蛋清细胞培养支架材料的制备方法，其特征在于，第（5）步得到的大孔改性蛋清培养支架材料进一步制备成冻干粉末。

3.根据权利要求1所述的大孔改性蛋清细胞培养支架材料的制备方法，其特征在于，第（4）步重复若干次是指的用PBS溶液重复三次，每次12 h洗涤去除多余及未交联的小分子脲。

4.根据权利要求1所述的大孔改性蛋清细胞培养支架材料的制备方法，其特征在于，所述紫外照射杀菌为超净台内紫外光照不超过30 min。

5.一种细胞培养方法，其中使用的细胞培养支架材料是通过权利要求1～4任一项所述的大孔改性蛋清细胞培养支架材料的制备方法得到，其特征在于，将大孔改性蛋清细胞培养支架移入六孔板中，向每孔加入0.4 mL事先准备好的SKOV3卵巢癌细胞悬液，细胞浓度为5 × 10⁴ cells/mL,细胞数量每孔不低于5×10⁴个；在培养过程中，小于等于7天的培养时间，采用连续追加培养液法进行培养；大于等于15天以上的培养期，则采用每3天各孔更新一半培养液的办法进行换液。

6.根据权利要求5所述的细胞培养方法，其特征在于，所用的细胞悬液为SKOV3卵巢癌贴壁细胞。

7.根据权利要求2所述的大孔改性蛋清细胞培养支架材料的制备方法得到的冻干粉末的应用，其特征在于，制备好的大孔改性蛋清细胞培养支架材料冻干粉末添加到贴壁培养瓶或皿里，短期培养后用以实现材料和细胞的分离。