[发明专利]一种高效分泌表达转肽酶SortaseA的方法

权利要求书

1.一种应用重组大肠杆菌高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法，其特征在于，包括以下步骤：活化重组大肠杆菌得到种子，按2％的接种量将培养好的种子接入发酵培养基装液量为10％的摇瓶，37℃、250rpm条件下培养至OD₆₀₀＝0.6之后，添加终浓度为1mM的IPTG和0.75％的甘氨酸进行诱导表达，于30℃、250rpm培养，并在诱导6h后添加2％的甘氨酸，总诱导培养时间为48h；

所述重组菌大肠杆菌为将来源于金黄色葡萄球菌的去除N端信号肽的srt基因，以pET22b为表达载体，以E.coli BL21(DE3)为宿主构建得到重组菌大肠杆菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按10％的接种量将预先培养好的种子接入发酵罐，7L发酵罐中所含发酵培养基为3L，通气量为3vvm，转速为500rpm，37℃培养，在OD₆₀₀达到0.6后加入终浓度为1mM的IPTG和0.75％的甘氨酸，降温至30℃诱导，并在诱导6h后添加2％的甘氨酸，总诱导培养时间为48h。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，发酵培养基每升含有：蛋白胨12g，甘油4g，KH₂PO₄ 2.31g，K₂HPO₄·3H₂O 16.4g。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，种子的获得方法为：将重组菌接种到种子培养基中，10mL试管装液3mL，温度为37℃，转速250rpm，培养时间为12-18h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，种子培养基每升含有：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L。