[发明专利]针对wbgZ基因鉴定宋内氏志贺氏菌的实时荧光PCR方法和试剂盒

权利要求书

1.针对wbgZ基因鉴定宋内氏志贺氏菌的实时荧光PCR的引物对及探针，其特征在于：所述引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的下游引物组成；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.3所示；或者，

所述引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.4所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.5所示的下游引物组成；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.6所示；或者，

所述引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.7所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.8所示的下游引物组成；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.9所示。

2.权利要求1所述引物对及探针在鉴定宋内氏志贺氏菌中的应用。

3.一种针对wbgZ基因鉴定宋内氏志贺氏菌的实时荧光PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）提取待检测样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以权利要求1所述引物对和探针建立PCR反应体系，进行实时荧光PCR扩增；（3）如果实时荧光PCR扩增结果中出现S型扩增曲线，则判定待检测样品中含有宋内氏志贺氏菌；如果实时荧光PCR扩增结果中没有出现S型扩增曲线，则判定待检测样品中不含宋内氏志贺氏菌。

4.按照权利要求3所述的实时荧光PCR方法，其特征在于：所述PCR反应体系的总体积为25μL；其中，FastStart Universal Probe Master 12.5μL，10pmol/μL上游引物1.0μL，10pmol/μL下游引物1.0μL，10pmol/μL探针1.0μL，20μg/mL的模板DNA 2.0μL，余量为灭菌蒸馏水。

5.按照权利要求4所述的实时荧光PCR方法，其特征在于：所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示，所述探针的核苷酸序列SEQ ID No.3所示。

6.按照权利要求3、4或5所述的实时荧光PCR方法，其特征在于：所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；

优选的，所述荧光报告基团为FAM荧光报告基团，所述荧光淬灭基团为TAMRA荧光淬灭基团。

7.按照权利要求3所述的实时荧光PCR方法，其特征在于：所述实时荧光PCR扩增的条件为：95℃3min；95℃变性30s，59℃退火30s，40个循环。

8.一种宋内氏志贺氏菌的实时荧光PCR检测试剂盒，包括：FastStart Universal Probe Master，扩增引物对、探针和灭菌蒸馏水；其特征在于：所述扩增引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的下游引物组成；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.3所示。

9.按照权利要求8所述的实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括：内参照引物对和探针；

优选的，所述内参照引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.10所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.11所示的下游引物组成，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.12所示；或者，

所述内参照引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.13所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.14所示的下游引物组成，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.15所示；或者，

所述内参照引物对由核苷酸序列为SEQ ID No.16所示的上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.17所示的下游引物组成，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.18所示；

更优选的，所述内参照引物对的退火温度为57℃。

10.按照权利要求8或9所述的实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；

优选的，所述荧光报告基团为FAM荧光报告基团，所述荧光淬灭基团为TAMRA荧光淬灭基团。