[发明专利]用于扩增粉虱科昆虫线粒体COI基因的特异性引物

说明书

技术领域

本发明属于应用生物技术领域，具体地说涉及一对用于扩增粉虱科昆虫线粒体细胞色素c氧化酶I(cytochrome c oxidase I；COI)基因的特异性引物。

背景技术

粉虱科(Aleyrodidae)，隶属于半翅目Hemiptera、胸喙亚目Sternorrhyncha。粉虱科昆虫分布于世界各大动物区，寄主植物广泛，部分种类是农业上的重要害虫。如重大农业害虫烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)，其在世界各地广泛分布传播，对农业生产造成了极大的经济损失。

在我国，对农业造成危害的粉虱种类有烟粉虱Bemisia tabaci、温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum、黑刺粉虱Aleurocanthus spiniferus、柑桔粉虱Dialeurodes citri、桑粉虱Pealius mori、稻粉虱Vasdavidius indicus还有近年来入侵海南的螺旋粉虱Aleurodicus dispersus等。粉虱类害虫主要以下三种方式危害寄主植物：(1)直接危害：成虫、若虫均能刺吸植物韧皮部的汁液。由于其发育快、繁殖力高，往往短时间内种群就可达到很高密度，从而吸取大量的汁液，导致植物衰弱。(2)间接危害：成虫、若虫分泌蜜露及蜡质物污染植物器官和果实，诱发煤烟病的发生，使植物光合作用受阻，导致叶片萎缩、枯萎和提前落叶，同时使农作物品质及质量下降。(3)部分粉虱是许多病毒病的重要传毒介体，所传播的植物病毒可引致植物畸形和果实败育，造成严重损失。例如B型烟粉虱可以传播多种植物病毒。

由于粉虱科昆虫体型微小，可塑性强，其形态特征会因环境条件、寄主植物差异等存在不同程度的变异，快速鉴定粉虱种类对于非粉虱研究专业人士来说比较困难。其次，目前鉴定粉虱还采用传统意义上的分类方法，及通过形态进行鉴定。但粉虱科昆虫较为特殊，很多粉虱的成虫特征上无明显差别，能用于分类的特征特别少。目前的粉虱科昆虫的分类在科和亚科的水平上依据于成虫和第四龄若虫(伪蛹)的特征，而在族、属和种的水平上则主要利用第四龄若虫(伪蛹)的特征。所以，对于异地采集保存在酒精中的粉虱害虫，采集的粉虱为其成虫，或者是保存不完整的标本等情况，仅仅通过形态鉴定显得十分困难。而分子鉴定技术相对准确、快速，且对于样品的保存相对简单，与样本的完整与否无关，因此，有必要发展其快速分子鉴定技木。随着分子生物学的发展，近年来分子生物学技术发展迅速，利用分子标记技术只需要少量的DNA就可以快速准确地鉴定出昆虫种类，该类技术不仅可以检测成虫，对其它各虫态亦具有同样的检测效能。所以，研究建立一种高效、快速、准确、灵敏且专一性强的粉虱科鉴别方法仍然十分必要。此外，也急需通过成熟的分子方法探讨鉴定昆虫的生物型，如烟粉虱等；建立粉虱科昆虫的系统发育关系和研究特定种的种群遗传分化和遗传结构等。

发明内容

本发明目的是提供一种粉虱科昆虫线粒体COI基因扩增的特异性引物，它能满足现有技术的上述需求。

一对用于粉虱科昆虫线粒体COI基因序列扩增的引物，其序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

本发明还公开了一种粉虱科昆虫线粒体COI基因序列扩增方法，是采用上述的引物，用50μl PCR体系在特定PCR扩增条件下进行目标片段扩增。

所述的50μl PCR体系是：5μl 10×buffer(+Mg2+)，2.5μl dNTP(2.5mM)，3μl上游引物(10μM)，3μl下游引物(10μM)，0.5μl rTaq酶(5U/μl)，2μl DNA模板(100ng)，34μl双蒸水。

所述的PCR扩增条件是：94℃预变性5分钟，94℃变性1分钟15秒，51℃退火温度1分钟15秒，72℃延伸1分钟5秒，共35个循环，最后72℃延伸10分钟。