[发明专利]一种基于稳定同位素标记的磷脂分类检测和定量方法

权利要求书

1.一种基于稳定同位素标记的磷脂分类检测和定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：从待检测样本中提取待检测磷脂；

步骤2：在甲基叔丁基醚/甲醇/1N盐酸溶液体系中，使三甲基硅重氮甲烷原位生成重氮甲烷；在甲基叔丁基醚/氘代甲醇/1N氘代盐酸溶液体系中，使三甲基硅重氮甲烷原位生成氘标记的重氮甲烷；

步骤3：所述重氮甲烷将所述待检测磷脂分子中的磷酸基团或羧酸基团甲酯化，产生轻同位素标记的磷酸甲酯化衍生物；所述氘标记的重氮甲烷将待检测磷脂分子中的磷酸基团或羧酸基团甲酯化，产生重同位素标记的磷酸甲酯化衍生物；

步骤4：将所述轻同位素标记的磷脂甲酯化衍生物和重同位素标记的磷脂甲酯化衍生物混合后，电离样本中分别经过轻同位素甲酯化衍生、重同位素甲酯化衍生的磷脂分子，产生一对具有质量差异的分子离子峰，所述待检测的离子种类包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、溶血性磷脂酰胆碱、溶血性磷脂酰乙醇胺、溶血性磷脂酰丝氨酸、溶血性磷脂酸、溶血性磷脂酰甘油、溶血性磷脂酰肌醇；

步骤5：在所述磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、溶血性磷脂酰胆碱、溶血性磷脂酰乙醇胺、溶血性磷脂酰丝氨酸、溶血性磷脂酸、溶血性磷脂酰甘油、溶血性磷脂酰肌醇上，分别选取加合H⁺的离子；

在磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇上，分别选取加合NH₄⁺的离子；

根据所述步骤4中不同种类离子的质谱裂解规律，设定不同的中性丢失或前提离子扫描模式，利用质谱对所述步骤4中离子进行分类检测，得到所述步骤4中不同种类离子的质谱离子信号的量；

步骤6：通过比较所述轻同位素标记的磷酸甲酯化衍生物和重同位素标记的磷酸甲酯化衍生物的质谱峰信号的相对强弱，关联于样本中待检测磷脂分子的量，得到样本中不同种类磷脂分子的相对量。

2.根据权利要求1所述的基于稳定同位素标记的磷脂分类检测和定量方法，其特征在于，利用质谱对所述步骤4中离子进行分类检测时，选用液相色谱—质谱联用的方式检测，或者，选用直接进样-质谱检测。

3.根据权利要求1所述的基于稳定同位素标记的磷脂分类检测和定量方法，其特征在于，所述甲基叔丁基醚/甲醇/1N盐酸溶液体系中，甲基叔丁基醚、甲醇、1N盐酸的体积比为300∶90∶4。

4.根据权利要求1所述的基于稳定同位素标记的磷脂分类检测和定量方法，其特征在于，所述甲基叔丁基醚/氘代甲醇/1N盐酸溶液体系中，甲基叔丁基醚、氘代甲醇、1N氘代盐酸的体积比为300∶90∶4。

5.根据权利要求1所述的基于稳定同位素标记的磷脂分类检测和定量方法，其特征在于，将所述轻同位素标记的磷酸甲酯化衍生物和重同位素标记的磷酸甲酯化衍生物混合进行质谱检测时，溶液体系为氯仿/甲醇/醋酸铵溶液体系，所述醋酸铵的浓度为5mM～10mM，所述氯仿、甲醇的体积比为(1～2)∶1。

6.根据权利要求1所述的基于稳定同位素标记的磷脂分类检测和定量方法，其特征在于，所述磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、溶血性磷脂酸、溶血性磷脂酰乙醇胺、溶血性磷脂酰甘油、溶血性磷脂酰丝氨酸、溶血性磷脂酰肌醇利用中性丢失扫描进行检测和定量；所述磷脂酰胆碱、溶血性磷脂酰胆碱利用前体离子扫描进行检测和定量。