[发明专利]基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒

权利要求书

1.一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒 ，包括粪便的前处理、粪便中微生物细胞的裂解、DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱，其特征是：

粪便的前处理：称取0.3-0.5g新鲜粪便于2ml离心管中，加入1-2ml Buffer A振荡1-2min， 3000-5000rpm/min离心10-20min，转移上清至新的离心管中，10000-12000rpm/min离心10-20min，弃上清，保留沉淀；

粪便中微生物细胞的裂解：往沉淀中加入450-600μl Buffer B和50-60μl Buffer C，混匀后37-40℃水浴1-2h，加入65-70μl Buffer D和65-70μl Buffer E，混匀后37-60℃水浴1-2h，加入100-200μl Buffer F和50-100μl Buffer G溶液，65-80℃水浴10-20min；

DNA的游离与杂蛋白的抽除：往溶液中加入600-800μl Buffer H，振荡器震荡30-60s后，12000-13000rpm/min 离心10-20min，将上清移至新的离心管中，加入等体积的Buffer I，12000-13000rpm/min 离心10-20min，将上清移至新的离心管中；

DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：往离心管中加入两倍体积的沉淀剂，混匀后加入DNA吸附柱，10000-13000rpm/min 离心1-2min，弃废液，加入500-600μl去蛋白液， 10000-13000rpm/min 离心1-2min，弃废液，加入300-500μl漂洗液，12000-13000rpm/min 离心1-2min，弃废液，加入500-600μl漂洗液， 12000-13000rpm/min 离心1-2min，弃废液， 12000-13000rpm/min 离心1-2min，静置吹干；

DNA洗脱：往吸附柱中加入30-60μl洗脱液，12000-13000rpm/min 离心1-2min，所得液体为粪便微生物基因组，取3-6μl DNA水溶液，于1-2%琼脂糖凝胶中电泳检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒，其特征是所述的DNA吸附柱为硅胶模吸附柱。

3.根据权利要求1所述的一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒，其特征是所述的Buffer A：0.25-0.37 mol/L磷酸二氢钾，0.175-0.2 mol/L氢氧化钠，PH=7-8；所述的Buffer B：10-20mM三羟甲基氨基甲烷，1-10mM乙二胺四乙酸，PH=5.0-8.0；所述的Buffer C为10-50mg/ml的溶菌酶；所述的Buffer D为20-50mg/ml的蛋白酶K；所述的Buffer E: 10-20%的十二烷基硫酸钠；所述的Buffer F: 3-8mol/L的氯化钠；所述的Buffer G: 0.14-0.28mol/L十六烷基三甲基溴化铵，0.5-1mol/ L氯化钠；所述的Buffer H: 酚:氯仿:异戊醇的体积比为25:24:1；所述的Buffer I: 氯仿:异戊醇的体积比为24:1。

4.根据权利要求1所述的一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒，其特征是所述的沉淀剂为70-80%的无水乙醇。

5.根据权利要求1所述的一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒，其特征是所述的去蛋白液：3-6M盐酸胍，10-30 mM三羟甲基氨基甲烷，pH=6.0-7.0，用前加乙醇，使得乙醇在去蛋白液中的终浓度为30-40％。

6.根据权利要求1所述的一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒，其特征是所述的漂洗液：20-50mM氯化钠，2-5mM三羟甲基氨基甲烷，pH=7.0-8.0，80-90%比重无水乙醇。

7.根据权利要求1所述的一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒，其特征是所述的洗脱液：10-20mM三羟甲基氨基甲烷，pH=8.0-9.0 。