[发明专利]一种用于神经突触形成分析中的细胞共培养方法

权利要求书

1.一种用于神经突触形成分析中的细胞共培养方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、将传代培养的非神经元细胞即HEK293 T细胞加入到体外环境中24孔原代培养的神经元细胞中，混合后培养24小时以上；

(2)、采用PEI转染法，转染HEK293 T细胞，每个孔中所转染的外源基因均不相同，每万个HEK293 T细胞中所添加的PEI为1μ g，被转染后的HEK293 T细胞过表达外源基因，在此条件下进行共培养48小时以上；

(3)、免疫染色突触前的标记蛋白synapsin，从而判断每一孔中是否形成突触结构。

2.根据权利要求1所述的用于神经突触形成分析中的细胞共培养方法，其特征在于：步骤(1)中，在每一孔中加入两万个HEK293 T细胞。

3.根据权利要求1所述的用于神经突触形成分析中的细胞共培养方法，其特征在于：步骤(3)中的具体步骤为：培养箱中取出转染过后的24孔板，用移液器吸掉所有培养基，加入PBS溶液清洗，去掉PBS溶液，加入4％的多聚甲醛，室温固定后，去掉多聚甲醛，加入Triton-100打孔细胞，再去掉Triton-100，用PBS清洗；在每孔中加入牛血清白蛋白，室温放置30分钟后去掉牛血清白蛋白，再加入稀释在5％BSA中的synapsin一抗，常温下放置2小时，用PBS清洗；再加入稀释在5％BSA的带546荧光的驴抗兔的二抗，常温下放置30分钟，用PBS清洗；用尖镊子挑出载玻片，将有神经元细胞的一面用封片剂贴在载玻片上；用激光共聚焦显微镜成像。