[发明专利]一种水稻千粒重基因TGW6引导RNA靶点序列及应用

权利要求书

1.一种水稻千粒重基因TGW6引导RNA靶点序列，其特征在于所述的水稻千粒重基因TGW6引导RNA靶点序列的寡核苷酸序列为：

TGW6U3-T1-F：5’-GGCAGCCAGCATCTGGACCTCGG3’；

TGW6U3-T1-R：5’-AAACCCGAGGTCCAGATGCTGGC3’；

TGW6U6a-T2-F：5’-GCCGGCTACAGCCATGAGAAGCA3’；

TGW6U6a-T2-R：5’-AAACTGCTTCTCATGGCTGTAGC3’；

TGW6U6b-T3-F：5’-GTTGAGGCAAGCGGCGACCGCGG3’；

TGW6U6b-T3-R：5’-AAACCCGCGGTCGCCGCTTGCCT3’。

2.权利要求1所述的水稻千粒重基因TGW6引导RNA靶点序列在编辑水稻基因组中的应用。

3.根据权利要求2所述的水稻千粒重基因TGW6引导RNA靶点序列在编辑水稻基因组中的应用，其特征在于：

所述的应用包括将权利要求1所述的引导RNA靶点序列的寡核苷酸链退火形成双链与载体连接，形成gRNA表达盒；将gRNA表达盒装载到CRISPR/Cas9载体上，得到三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体；将三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体转化植物组织，并将转化的植物组织培育成转基因植株，得到水稻千粒重基因tgw6突变体。

4.一种三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体，其特征在于：含有权利要求1所述的水稻千粒重基因TGW6引导RNA靶点序列片段。

5.根据权利要求4所述的三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

将权利要求1所述的引导RNA靶点序列的寡核苷酸链退火形成双链，然后分别与BsaI酶切后的pYL-U3-gRNA、pYL-U6a-gRNA和pYL-U6b-gRNA连接，得到三个gRNA表达盒；然后通过Goldengatecloning的方法将gRNA表达盒全部依次装载到CRISPR/Cas9载体上，得到三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体。

6.根据权利要求5所述的三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体的制备方法，其特征在于：

所述的Goldengatecloning的引物为：

U3-T1-F：5’-TTCAGAGGTCTCTCTCGCACTGGAATCGGCAGCAAAGG-3’；

U3-T1-R：5’-AGCGTGGGTCTCGTCAGGGTCCATCCACTCCAAGCTC-3’；

U6a-T2-F：5’-TTCAGAGGTCTCTCTGACACTGGAATCGGCAGCAAAGG-3’；

U6a-T2-R：5’-AGCGTGGGTCTCGTCTTGGTCCATCCACTCCAAGCTC-3’；

U6b-T3-F：5’-TTCAGAGGTCTCTAAGACACTGGAATCGGCAGCAAAGG-3’；

U6b-T3-R：5’-AGCGTGGGTCTCGACCGGGTCCATCCACTCCAAGCTC-3’。

7.根据权利要求5所述的三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体的制备方法，其特征在于：

所述的CRISPR/Cas9载体为pYLCRISPR/Cas9P_ubi-H。

8.一种水稻千粒重基因tgw6突变体，其特征在于：是通过将权利要求4所述的三靶点CRISPR/Cas9-gRNA载体转化植物组织，并将转化的植物组织培育成转基因植株得到的。

9.根据权利要求8所述的水稻千粒重基因tgw6突变体，其特征在于：

所述的水稻的品系为H447；

所述的H447为R819/玉香占//R819BC₂F₇代稳定品系。

10.权利要求书8或9所述的水稻千粒重基因tgw6缺失突变体在水稻种植领域中的应用。