[发明专利]表达鼠伤寒沙门菌OmpL蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗有效
| 申请号： | 201510452639.8 | 申请日： | 2015-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN105132437B | 公开（公告）日： | 2018-06-08 |
| 发明（设计）人： | 范红结;周红;蔺辉星;方一臻 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学;南京昌吉生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/63;C12N15/863;C12N7/01;A61K48/00;A61K39/112;A61P31/04 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;杨秀丽 |
| 地址： | 210095 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鼠伤寒沙门菌 猪痘病毒 猪痘病毒载体 免疫动物 外膜蛋白 疫苗 体内 编码基因序列 生物制品领域 免疫保护率 编码基因 免疫效果 灭活疫苗 目的蛋白 弱毒疫苗 新型疫苗 诱导动物 转移载体 高效价 抗体 小鼠 制备 蛋白 基因 应用 | ||
1.一种鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L的编码基因，其特征在于：该编码基因序列如SEQ IDNO.1所示，表达的外膜蛋白L影响鼠伤寒沙门菌的免疫和致病。
2.一种鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因的转移载体pUSG11/P28-OmpL，其特征在于：该转移载体具有鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因，其序列如SEQ ID NO.1所示，通过将鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因序列插入到
3.一种重组猪痘病毒rSPV-OmpL，其特征在于：所述猪痘病毒是在猪痘病毒VR-363中插入鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因获得的，其中，所述鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因序列如SEQID NO.1所示，能够表达目的蛋白OmpL。
4.一种疫苗，其特征在于：该疫苗由权利要求3所述的重组猪痘病毒rSPV-OmpL组成，重组猪痘病毒包括猪痘病毒载体VR-363和鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因。
5.重组猪痘病毒rSPV-OmpL的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）引物设计：根据鼠伤寒沙门菌的基因序列设计一对针对
（2）目的基因片段与载体连接：以鼠伤寒沙门菌基因组为模板，通过步骤（1）设计的特异性引物进行PCR扩增获得扩增片段；利用限制性内切酶
（3）重组猪痘病毒rSPV-OmpL的构建：用脂质体转染法使穿梭载体pUSG11/P28-OmpL与猪痘病毒发生同源重组，收获重组猪痘病毒rSPV-OmpL原液；
（4）通过噬斑纯化重组猪痘病毒。
6.权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的特异性引物为，P1序列如SEQ ID NO.2所示，P2序列如SEQ ID NO.3所示。
7.权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的重组猪痘病毒rSPV-OmpL原液的构建方法为：提前一天将PK15细胞接种到24孔细胞培养板上，使其长成单层细胞；先用0.05MOI的SPV感染PK15单层细胞，1 h后将脂质体与穿梭载体的混合液加入到24孔细胞培养板中；PK15细胞继续在37℃ 5%的二氧化碳培养箱中培养4天，待能看到明显的病毒噬斑后，将其反复冻融3次，收获重组猪痘病毒rSPV-OmpL原液。
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