[发明专利]表达鼠伤寒沙门菌OmpL蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗

说明书

本发明属于生物制品领域，提供一种鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L的编码基因、包括该基因的转移载体pUSG11/P28‑OmpL、重组猪痘病毒rSPV‑OmpL及其应用、制备方法。编码基因序列如SEQ ID NO.1所示。重组猪痘病毒是在猪痘病毒VR‑363中插入鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因获得的。重组猪痘病毒载体疫苗rSPV‑OmpL能够在免疫动物体内大量表达目的蛋白OmpL，能够诱导动物体内产生较高效价的针对OmpL的抗体，并对免疫动物产生良好的保护作用，对小鼠的免疫保护率可高达80％，兼具有弱毒疫苗的免疫效果好和灭活疫苗的安全性高等特点，是一种理想的新型疫苗。

技术领域

本发明属于生物制品领域，涉及一种表达鼠伤寒沙门菌OmpL蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗，具体涉及一种鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L的编码基因、包括该基因的转移载体pUSG11/P28-OmpL、重组猪痘病毒rSPV-OmpL及其应用、制备方法。

背景技术

鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)是一种重要的人畜共患病原菌，其感染发病率居沙门菌感染的首位。鼠伤寒沙门菌在自然界分布广泛，主要经水和食物传播，可引起人类和动物的多种疾病。鼠伤寒沙门菌感染仔猪，可导致仔猪副伤寒(swineparatyphoid)。主要引起猪的败血症、肠炎、肺炎和肝炎，也可使怀孕母猪发生流产。随着养猪业的集约化发展，该病对猪场正常生产的不利影响越来越大。

外膜蛋白L(outer membrane porin L，OmpL)是鼠伤寒沙门菌外膜中的主要结构，对该菌的免疫和致病作用都有重要影响。OmpL蛋白具有良好的免疫原性，能增强实验动物的细胞免疫和体液免疫，抵抗同源菌或异源菌的攻击，不同血清型菌株之间具有相同的外膜蛋白免疫抗原，可产生交叉免疫保护作用。

重组猪痘病毒(Swinepox virus，SPV)作为表达载体，有许多特有的优点：(1)SPV的复制发生在细胞质内，避免了病毒基因组整合到宿主细胞染色体中的可能，从而消除了对人类和其他动物的潜在威胁。(2)SPV基因组容量大，至少能容纳25kb外源基因的插入，适合研制多价疫苗，并且具有多个复制非必需基因可用作外源基因的插入位点。(3)SPV只感染猪，具有严格的宿主特异性，生物安全性高。(4)重组SPV载体疫苗有多种接种途径，包括口服免疫，可大大降低劳动强度，同时可避免因疫苗接种导致的应激反应。目前，并没有报道利用SPV载体构建表达鼠伤寒沙门菌的外膜蛋白L的重组猪痘病毒，更没有利用SPV载体表达鼠伤寒沙门菌的外膜蛋白L预防鼠伤寒沙门菌的疫苗或药物的报道。

发明内容

本发明的目的是研制一种能够有效防制鼠伤寒沙门菌的重组猪痘病毒载体疫苗，对猪感染鼠伤寒沙门菌的预防工作提供有力的支持。

本发明的目的通过以下技术方案实现

1.本发明提供一种鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L的编码基因，该编码基因序列如SEQiD NO.1所示，表达的外膜蛋白L影响鼠伤寒沙门菌的免疫和致病。

2.本发明还提供一种鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因的转移载体pUSG11/P28-OmpL，该专利载体具有鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因，其序列如SEQ ID NO.1所示，通过将鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因序列插入到BamHI和SalI酶切位点之间。

3.本发明还提供一种重组猪痘病毒rSPV-OmpL，所述猪痘病毒是在猪痘病毒VR-363中插入鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因获得的，其中，所述鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因序列如SEQ ID NO.1所示，能够表达目的蛋白OmpL。

本发明通过Western blot、间接免疫荧光检测证明重组猪痘病毒rSPV-OmpL能够在细胞内高效率的表达蛋白OmpL。通过动物免疫试验，重组猪痘病毒rSPV-OmpL能够在免疫动物体内大量表达目的蛋白OmpL，能够诱导动物体内产生较高效价的针对OmpL的抗体，并对免疫动物产生良好的保护作用。