[发明专利]一种以改性硅藻土为载体的固定化芽胞漆酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种固定化芽胞漆酶，其特征在于，其以3-氨丙基三乙氧基硅烷氨基化的硅藻土为载体，通过共价结合和/或物理吸附的作用将具漆酶活力的芽胞固定在硅藻土表面或孔隙中，其中所述硅藻土为Celite 545，其中所述具漆酶活力的芽胞由短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)产生，其由以下步骤制备而成：

(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞；

(2)改性硅藻土的制备：称取2g硅藻土，浸泡于20－100ml有机溶剂中，再往其中添加1－20ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷，充分混匀，再将其置于50－120℃水浴回流或摇床上旋转振荡2－24h；洗涤，抽滤并收集；

(3)共价连接：将制备好的改性硅藻土按20－100mg改性硅藻土:1ml缓冲液分散到pH5-8的缓冲液中；往上述混合物中添加碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.1－2.0mg/ml，并使用超声波振荡5－30min，使其充分分散；往含碳二亚胺盐酸盐的混合液中添加芽胞，使其终浓度为1.0－10.0mg/ml，并用超声波振荡处理10－60min；将经上述处理得到的混合物直接转移至摇床，在4－40℃，50－250r/min条件下处理1－48h；

(4)回收：芽胞与改性硅藻土混合物经混合固定化处理后，过滤，用缓冲液冲洗1－5次，分别收集上清液和固定化芽胞，保藏于0－40℃。

2.一种制备权利要求1所述固定化芽胞漆酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞；

(2)改性硅藻土的制备：称取2g硅藻土，浸泡于20－100ml有机溶剂中，再往其中添加1－20ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷，充分混匀，再将其置于50－120℃水浴回流或摇床上旋转振荡2－24h；洗涤，抽滤并收集；

(3)共价连接：将制备好的改性硅藻土按20－100mg改性硅藻土:1ml缓冲液分散到pH5-8的缓冲液中；往上述混合物中添加碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.1－2.0mg/ml，并使用超声波振荡5－30min，使其充分分散；往含碳二亚胺盐酸盐的混合液中添加芽胞，使其终浓度为1.0－10.0mg/ml，并用超声波振荡处理10－60min；将经上述处理得到的混合物直接转移至摇床，在4－40℃，50－250r/min条件下处理1－48h；

(4)回收：芽胞与改性硅藻土混合物经混合固定化处理后，过滤，用缓冲液冲洗1－5次，分别收集上清液和固定化芽胞，保藏于0－40℃。

3.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述有机溶剂为无水乙醇，体积为48ml，所述3-氨丙基三乙氧基硅烷添加量为2ml，所述反应温度为70℃，所述旋转振荡时间为12h。

4.权利要求2-3任一所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述改性硅藻土添加量为50mg/ml，所用缓冲液是浓度为0.05M，pH为7的磷酸二氢钾－磷酸氢二钾缓冲液，碳二亚胺盐酸盐的添加量为0.4mg/ml，添加碳二亚胺盐酸盐后超声波处理时间为10min。

5.权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述芽胞添加量为5mg/ml，添加芽胞后超声波处理时间为30min,固定化的条件为室温，200r/min，12h。

6.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶在染料废水的脱色处理中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，向废水中添加介体，所述介体为2,2'-联氮基-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐。

8.根据权利要求6-7任一所述的应用，其特征在于，所述的染料为甲基绿、甲基红或酸性红1中的一种或几种。