[发明专利]一种以改性硅藻土为载体的固定化芽胞漆酶及其制备方法与应用有效

专利信息
申请号: 201510455681.5 申请日: 2015-07-29
公开(公告)号: CN105063008B 公开(公告)日: 2018-08-07
发明(设计)人: 管政兵;周稳;廖祥儒;蔡宇杰;陈康 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N11/14 分类号: C12N11/14;C02F3/34;C02F101/38
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 214122 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 改性 硅藻土 载体 固定 化芽胞漆酶 及其 制备 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种固定化芽胞漆酶,其特征在于,其以3-氨丙基三乙氧基硅烷氨基化的硅藻土为载体,通过共价结合和/或物理吸附的作用将具漆酶活力的芽胞固定在硅藻土表面或孔隙中,其中所述硅藻土为Celite 545,其中所述具漆酶活力的芽胞由短小芽胞杆菌(Bacilluspumilus)产生,其由以下步骤制备而成:

(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞;

(2)改性硅藻土的制备:称取2g硅藻土,浸泡于20-100ml有机溶剂中,再往其中添加1-20ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷,充分混匀,再将其置于50-120℃水浴回流或摇床上旋转振荡2-24h;洗涤,抽滤并收集;

(3)共价连接:将制备好的改性硅藻土按20-100mg改性硅藻土:1ml缓冲液分散到pH5-8的缓冲液中;往上述混合物中添加碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.1-2.0mg/ml,并使用超声波振荡5-30min,使其充分分散;往含碳二亚胺盐酸盐的混合液中添加芽胞,使其终浓度为1.0-10.0mg/ml,并用超声波振荡处理10-60min;将经上述处理得到的混合物直接转移至摇床,在4-40℃,50-250r/min条件下处理1-48h;

(4)回收:芽胞与改性硅藻土混合物经混合固定化处理后,过滤,用缓冲液冲洗1-5次,分别收集上清液和固定化芽胞,保藏于0-40℃。

2.一种制备权利要求1所述固定化芽胞漆酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞;

(2)改性硅藻土的制备:称取2g硅藻土,浸泡于20-100ml有机溶剂中,再往其中添加1-20ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷,充分混匀,再将其置于50-120℃水浴回流或摇床上旋转振荡2-24h;洗涤,抽滤并收集;

(3)共价连接:将制备好的改性硅藻土按20-100mg改性硅藻土:1ml缓冲液分散到pH5-8的缓冲液中;往上述混合物中添加碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.1-2.0mg/ml,并使用超声波振荡5-30min,使其充分分散;往含碳二亚胺盐酸盐的混合液中添加芽胞,使其终浓度为1.0-10.0mg/ml,并用超声波振荡处理10-60min;将经上述处理得到的混合物直接转移至摇床,在4-40℃,50-250r/min条件下处理1-48h;

(4)回收:芽胞与改性硅藻土混合物经混合固定化处理后,过滤,用缓冲液冲洗1-5次,分别收集上清液和固定化芽胞,保藏于0-40℃。

3.权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述有机溶剂为无水乙醇,体积为48ml,所述3-氨丙基三乙氧基硅烷添加量为2ml,所述反应温度为70℃,所述旋转振荡时间为12h。

4.权利要求2-3任一所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述改性硅藻土添加量为50mg/ml,所用缓冲液是浓度为0.05M,pH为7的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液,碳二亚胺盐酸盐的添加量为0.4mg/ml,添加碳二亚胺盐酸盐后超声波处理时间为10min。

5.权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述芽胞添加量为5mg/ml,添加芽胞后超声波处理时间为30min,固定化的条件为室温,200r/min,12h。

6.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶在染料废水的脱色处理中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,向废水中添加介体,所述介体为2,2'-联氮基-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐。

8.根据权利要求6-7任一所述的应用,其特征在于,所述的染料为甲基绿、甲基红或酸性红1中的一种或几种。

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