[发明专利]毛钩藤的快速繁殖方法

权利要求书

1.一种毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、制作毛钩藤的无菌外植体；

步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为24C～26℃，诱导腋芽形成；所述第一培养基包括white培养基、1～1.3mg/L的竹醋液、35g/L的蜜二糖和4g/L的琼脂；

步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为24C～26℃，培养直至生根；其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方；

所述固态培养基包括white培养基、0.1～0.2mg/L的珍珠粉、0.1～0.5mg/L的激动素KT、0.7～0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1～0.5g/L的活性炭；

所述液态培养基包括B5培养基、0.6～0.9mg/L的竹醋液和0.2～0.4mg/L的火龙果提取液；所述火龙果提取液的制作方法为将火龙果果皮破碎，用火龙果果皮质量10倍的50％的乙醇水溶液浸泡7小时，之后在55℃下萃取8小时，过滤，取滤液，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.05～0.06MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述火龙果提取液。

2.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，在进行所述步骤三之前，还将所得的带腋芽的毛钩藤的无菌外植体进行脉冲电击处理：将带腋芽的毛钩藤的无菌外植体下方的1/3处浸泡于导电液中，控制电压为220v，脉冲频率为380mHz，进行电击处理3-5s；所述导电液为质量分数为25％的硝酸钾溶液。

3.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤三中，从无菌外植体的下方开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/5浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的1/3置于所述固态培养基中。

4.如权利要求3所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，所述培养盒包括：

盒体，其为中空圆柱状；

隔板，其为圆形，所述隔板的直径略小于所述盒体的直径，所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内，使所述盒体形成上部空间和下部空间，所述隔板平行于所述盒体的底部，所述隔板上间隔设置有2～4个使所述无菌外植体通过的第一通孔；

其中，所述盒体的底部设置有排水管，所述排水管上设有第一控制阀，所述盒体的下部空间的侧壁设置有进水管，所述进水管上设有第二控制阀，所述固态培养基设置于所述上部空间中，所述液态培养基置于所述下部空间中。

5.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，还包括：步骤四、将生根的毛钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10∶1∶10∶2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；

所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4∶1∶2∶5构成。

6.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中，选取毛钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，摘除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2-4cm长的带腋芽的嫩茎段作为毛钩藤的无菌外植体。

7.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中，对毛钩藤的外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用质量比为1∶100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，再用无菌水润洗所述外植体三遍，之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1％的竹醋液中25-30min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体20-30s。

8.如权利要求1所述的毛钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，毛钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时，调节pH为5.7，控制光照强度为18001x，每天的光照时间为10小时；毛钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养时，调节所述固态培养基的pH为5.7，调节所述液态培养基的pH为5.3，控制光照强度为20001x，每天的光照时间为12小时。