[发明专利]核酸检测试纸条及其制备方法和检测核酸的方法

权利要求书

1.一种核酸检测试纸条，其依次包括样品垫、连接垫、纤维膜和吸附垫，纤维膜上依次设置有检测线和控制线，其特征在于，所述连接垫上结合有碱性磷酸酶，所述检测线上结合有能与待检测的目的核酸杂交的特异性探针，所述控制线上结合有通用探针，并且所述通用探针与扩增待检测目的核酸的PCR所用的上游引物和/或下游引物反向互补。

2.一种核酸检测试剂盒，所述试剂盒包括根据权利要求1所述的核酸检测试纸条，以及显色底物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述显色底物为3-氨基-9-乙基咔唑。

4.一种制备根据权利要求1所述的核酸检测试纸条的方法，其包括如下步骤：

1)制备依次包括样品垫、连接垫、纤维膜和吸附垫，纤维膜上依次设置有检测线和控制线的试纸条；

2)在连接垫处用碱性磷酸酶处理；

3)在检测线处用与待检测的目的核酸杂交的特异性探针处理；

4)在控制线处用与扩增待检测目的核酸的PCR所用的上游引物和/或下游引物反向互补的通用探针处理。

5.一种用核酸试纸条来检测核酸的方法，包括如下步骤：

1)根据待检测的目的核酸制备与待检测的目的核酸杂交的特异性探针，并由此制备根据权利要求1所述的核酸检测试纸条或者根据权利要求2或3所述的核酸检测试剂盒；

2)提取并用被生物素标记的上游引物和/或下游引物通过PCR来扩增待检测的目的核酸，得到扩增产物；

3)对试纸条在20-60摄氏度、优选38-42摄氏度下进行提前温育10分钟以上，然后向步骤2)获得的扩增产物中加入扩展液和显色底物并混匀，向步骤1)制备得到的核酸检测试纸条或者核酸检测试剂盒中的核酸检测试纸条的样品垫上滴加1-100微升，优选为5-20微升，更优选为8-12微升混匀后的混合物，再在40摄氏度下温育5-60分钟、优选10-30分钟、更优选13-17分钟，观察结果，或者

向步骤2)获得的扩增产物中加入扩展液和显色底物并混匀，在向步骤1)制备得到的核酸检测试纸条或者核酸检测试剂盒中的核酸检测试纸条的样品垫上滴加1-100微升，优选为5-20微升，更优选为8-12微升混匀后的混合物的同时在38-42摄氏度下温育5-60分钟、优选10-30分钟、更优选10-15分钟，观察结果。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，在根据权利要求1所述的核酸检测试纸条或者根据权利要求2或3所述的核酸检测试剂盒中，通用探针与扩增待检测目的核酸的PCR所用的上游引物反向互补，

并且，在步骤2)中，上游引物被生物素标记。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，在根据权利要求1所述的核酸检测试纸条或者根据权利要求2或3所述的核酸检测试剂盒中，通用探针与扩增待检测目的核酸的PCR所用的下游引物反向互补，

并且，在步骤2)中，下游引物被生物素标记。