[发明专利]铁皮石斛组培一步成苗批量化生产的方法

说明书

技术领域

本发明属于铁皮石斛的组培技术领域，具体涉及一种铁皮石斛组培苗一步成苗批量化生产的方法。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛，属多年生草本植物。铁皮石斛的药用与保健价值极高，“铁皮石斛”一词始出自《神农本草经》，国际药用植物界称其为“药界大熊猫”；被民间称作“救命仙草”。现代临床应用和药理研究证实，铁皮石斛具有滋阴润肺、养胃生津、健脑明目、保肝宁心、清热降火、补五脏之虚劳、轻身延年的神奇功效。对慢性疲劳综合症、肺病、冠心病、肾病、慢性肝病、高血压、高血脂、高血糖、糖尿病、慢性胃病、干燥综合症、癌症等疾病都有确切疗效和调理康复作用。可增强肌体免疫力、抗氧化、抗衰老，对烟酒过度、劳累过度、夜生活过度、用眼用脑过度、声音嘶哑、口干舌燥等康复有特殊疗效。

铁皮石斛的种子极小、无胚乳，每粒种子只有3‐4个细胞，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培；而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，加上人为的过度采挖和生态环境的破坏，其资源已濒临灭绝。铁皮石斛组织培养快速繁殖技术是解决铁皮石斛大面积栽培用苗的一个最有效的途径。

近年来，科研工作者对铁皮石斛组织培养快速繁殖进行了大量产业化技术研究，但是大部分采用外植体—原球茎诱导—分化—壮苗--生根—移栽的途径进行工厂化生产，培养程序特别繁琐；另外，培养基需添加特殊成份，才能获得优质健壮的种苗。如最新的铁皮石斛中国专利201310681992.4、201310699964.5、201410113720.9等，除基本培养基和激素外，还需添加香蕉汁、或马铃薯汁、或脯氨酸、或水解酪蛋白、或茶多酚、或活性炭等其它成份，才能获得健壮的试管苗，以至于市场上铁皮石斛组培苗价格高，至少要15元/瓶。种植户买不起优质种苗，从而制约了铁皮石斛优质种苗产业化推广。因此，本发明致力于开发一种高效、低成本的培养体系。

发明内容

针对铁皮石斛的组织培养培养程序繁琐、成本高的问题，本发明目的是提供一种繁殖周期短、成本低的铁皮石斛高效低耗量的组织培养方法。本发明方法非常适合工业化生产，而且达到产业化水平。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

铁皮石斛组培一步成苗批量化生产的方法，包括以下步骤：

(1)原球茎的繁殖：选择优良铁皮石斛植株的顶芽或腋芽为外植体，外植体消毒后在MS+6-BA0.1～3.0mg/L+KT0.2～1.0mg/L+IAA0.1～1.0mg/L+NAA0.2～2.0mg/L+矮壮素0.01～0.5mg/L琼脂固体培养基上，诱导原球茎的同时分化出健壮芽；

(2)一步成苗批量化生产：将步骤(1)获得的带芽原球茎直接转入MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IAA0.2～0.5mg/L+NAA0.1～2.0mg/L+矮壮素0.5～2.0mg/L的琼脂固体培养基上进行增殖、分化、壮苗和生根；

(3)试管苗移栽。

步骤(1)中将外植体剪成0.5-1cm长含有1节1芽(即至少含有一个顶芽或者腋芽的茎段)的规格。

步骤(1)外植体消毒过程：首先用洗衣粉清洗干净，在无菌操作台上用无菌水洗5～7次，用70％酒精浸润30秒～1分钟，再放入0.1％的升汞溶液中灭菌8～15分钟，无菌水冲洗5～6次，备用。

步骤(1)优选使用的培养基：MS+6-BA2.0mg/L+KT0.5mg/L+IAA0.25mg/L+NAA0.5mg/L+矮壮素0.1mg/L；或者优选使用培养基：MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+IAA0.3mg/L+NAA0.4mg/L+矮壮素0.3mg/L。

步骤(1)诱导出的原球茎继续继代培养，每隔40～50d继代一次。

步骤(2)优选使用的培养基：MS+6-BA0.3mg/L+IAA0.3mg/L+NAA0.4mg/L+矮壮素0.6mg/L；或者优选使用培养基：MS+6-BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.6mg/L+矮壮素0.9mg/L。

步骤(2)培养时每隔35～45d出苗一次。

步骤(1)和(2)的培养温度为24℃±2，1000～2000lx环境中，每天10～12小时光照培养。