[发明专利]一种融合蛋白SACP、编码基因、工程菌及其应用有效
申请号: | 201510464192.6 | 申请日: | 2015-07-31 |
公开(公告)号: | CN105037556B | 公开(公告)日: | 2018-05-04 |
发明(设计)人: | 孙燕;卢陈杰;李玉儒;刘欢欢 | 申请(专利权)人: | 杭州师范大学 |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N15/72;C12N1/21;C12P21/02;A61L15/32;A61L15/42;C12R1/19 |
代理公司: | 杭州天正专利事务所有限公司33201 | 代理人: | 黄美娟,李世玉 |
地址: | 310036 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 融合 蛋白 sacp 编码 基因 工程 及其 应用 | ||
1.一种融合蛋白SACP,其特征在于所述融合蛋白SACP的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示。
2.一种权利要求1所述融合蛋白SACP的编码基因,其特征在于所述编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。
3.一种由权利要求2所述编码基因构建的重组载体。
4.一种由权利要求3所述重组载体转化制备的重组基因工程菌。
5.一种权利要求1所述融合蛋白SACP的制备方法,其特征在于所述方法为:将含融合蛋白SACP基因的工程菌接种至自诱导培养基,培养温度为16~40℃,培养时间为12~24h,将培养液离心,收集菌体,并将菌体重悬于细胞破碎缓冲溶液中,超声破碎,然后再次离心,收集上清液,最后将上清液过阳离子柱进行梯度洗脱,以含终浓度0.5~3.0M尿素和300~1000mM氯化钠的细胞破碎缓冲液为洗脱剂,收集目标洗出液,经透析和冷冻干燥,获得融合蛋白SACP;自诱导培养基配方为:酵母抽提物2.0~6.0g/L,胰蛋白胨5.0~10.0g/L,酪蛋白胨5.0~10.0g/L,葡萄糖0.1~2.0g/L,磷酸氢二钾4.0~8.0g/L,磷酸二氢钾3.0~9.0g/L,磷酸铵2.0~5.0g/L,硫酸镁0.2~1.5g/L,氯化钙2.0~6.0mg/L,氯化钴0.5~4.0mg/L,氯化铜0.5~2.0mg/L,硫酸锰1.0~8.0mg/L,钼酸钠3.0~7.0mg/L,硼酸0.1~0.6mg/L,氯化铁1.0~7.0mg/L,氯化锌0.5~2.5mg/L,甘油1.0~10.0g/L,丝氨酸0.5~2.0g/L,甘氨酸2.0~8.0g/L,丙基硫代-β-D-半乳糖苷24-320mg/L,溶剂为去离子水,pH7.0;所述细胞破碎缓冲液组成为:100mM氯化钠、50mM磷酸二氢钠,溶剂为去离子水,pH5.5。
6.一种权利要求1所述融合蛋白SACP在制备伤口敷料药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述伤口敷料药物是将融合蛋白SACP、壳聚糖和甘油共混,溶于体积浓度为2%的醋酸水溶液中,干燥制成薄膜,获得伤口敷料药物;所述融合蛋白SACP与壳聚糖、甘油质量比为1:0.25~4:0.25~1。
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