[发明专利]一种基于AuNPs-PDDA-GR复合材料的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于AuNPs-PDDA-GR复合材料的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用1.0μm、0.3μm、0.05μm的Al₂O₃抛光粉依次打磨直径为4mm的玻碳电极(GCE)，分别在乙醇和超纯水中超声清洗3min，氮气吹干，取10μLAuNPs-PDDA-GR分散液滴涂到电极表面，室温下晾干成膜，用PBS(pH7.4)缓冲溶液冲洗以除去未键合的AuNPs-PDDA-GR得到AuNPs-PDDA-GR/GCE；

(2)取50μL1~2.5μg/mL的癌胚抗原抗体(anti-CEA)标准溶液滴涂到电极表面，在4℃冰箱中孵育12h，用PBS(pH7.4)缓冲溶液冲洗除去物理吸附得到anti-CEA/AuNPs-PDDA-GR/GCE；

(3)取50μL质量分数为1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到电极表面，在37℃下孵育1h，以封闭非特异性结合位点，用PBS(pH7.4)缓冲溶液冲洗电极表面得到BSA/anti-CEA/AuNPs-PDDA-GR/GCE；

(4)滴加50μL浓度为0.1pg/mL~10ng/mL的一系列不同浓度的癌胚抗原标准溶液用于与抗体特异性识别，在37℃下孵育60min，用PBS(pH7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于AuNPs-PDDA-GR复合材料的癌胚抗原电化学免疫传感器(CEA/BSA/anti-CEA/AuNPs-PDDA-GR/GCE)。

2.根据权利要求1所述的一种基于AuNPs-PDDA-GR复合材料的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备方法，所述的AuNPs-PDDA-GR分散液，其特征在于，制作步骤如下：

(1)PDDA-GR的制备

称取50mg的氧化石墨烯(GO)溶于100mL超纯水中，超声2h得到均一分散的溶液，然后向该溶液中加入0.5mL质量分数为20%的PDDA溶液，搅拌30min，再向该溶液中加入0.5mL80%的水合肼，90℃油浴搅拌24h，得到PDDA-GN黑色悬浊液，离心洗涤至中性后重新分散到超纯水中得到PDDA-GR溶液；

(2)金纳米溶液(AuNPs)的制备

量取97mL的超纯水于锥形瓶，在搅拌下加入1mL0.01mol/L的HAuCl₄和1mL的0.03mol/L柠檬酸二钠，之后逐滴滴加1mL0.047mol/L的硼氢化钠至溶液变为亮酒红色，再搅拌15min得AuNPs溶液；

(3)AuNPs-PDDA-GR分散液的制备

取0.1mLPDDA-GN在搅拌的条件下加入到5mLAuNPs溶液中，超声60min后搅拌30min，得到的混合溶液在9000转离心10min，用超纯水洗涤3次后再重新分散到1mL超纯水中，得到AuNPs-PDDA-GR分散液。

3.根据权利要求1所述的制备方法制备的一种基于AuNPs-PDDA-GR复合材料的癌胚抗原电化学免疫传感器，其特征在于，用于CEA的检测，检测步骤如下：

(1)实验在电化学工作站上进行，采用三电极体系以所制备的免疫传感器为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为对电极，在10mL2×10^-4mol/LK₃Fe(CN)₆和0.1mol/LKCl的PBS(pH7.4)缓冲溶液中进行测试；

(2)用差分脉冲伏安法对一系列不同浓度CEA标准溶液及未特异性结合CEA的电极进行检测，扫描的电位区间为-0.2V~0.6V，扫描速度为100mV/s，记录示差脉冲伏安图，根据所得的峰电流值和CEA浓度的对数呈线性关系，绘制工作曲线；

(3)将待测样品溶液代替CEA标准溶液进行检测。