[发明专利]针对乙肝表面蛋白全人源单克隆抗体的制备及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了抗乙肝表面蛋白抗体的制备技术及其在预防HBV感染和治疗HBV相关肝细胞肝癌中的用途。

背景技术

乙肝病毒(Hepatitis B virus，HBV)是双链DNA病毒，人体被感染后易引起慢性乙型肝炎，进而导致肝硬化和(或)肝癌。据统计近年来全球约有3.5亿HBV感染者，每年约有100万～150万人死于急性或慢性HBV感染导致的肝功能衰竭，肝硬化和(或)肝癌，因而预防HBV感染成为世界公共健康问题^[1]。肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC，简称肝癌)与病毒性肝炎的关系密切，是病毒性肝炎所引起的最重要死亡原因之一，亦是临床上最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内是位居第三的肿瘤相关致死原因，每年新发病例中我国占全球42.5％，已成为我国第二位的肿瘤病因。

研究表明，HBV感染相关HCC患者中，HBV DNA载量高者(>105copies/ml)的HCC发生率达10.1％，而HBV DNA载量低者(<104copies/ml)的HCC发生率仅为3.8％，基线高病毒载量与HCC发生率升高有关。高病毒载量(HBV DNA≥0.7mEq/ml)时，HCC复发危险比为5.13，切口缘阳性的HCC复发危险比为2.14。因此，对乙肝患者进行抗病毒治疗，有助于延缓疾病向HCC的进展。对HBV相关HCC患者进行抗病毒治疗，可通过改善肝功能而提高生存率。近年的研究显示，高HBV DNA载量与高HCC复发率及预后不良有关。对HBV感染相关HCC术后患者进行抗病毒治疗可能是除肝移植以外的另一种治疗选择，该治疗可通过改善肝功能而提高生存率。

目前针对HBV感染主要采用α-干扰素和核苷酸类似物等药物抗病毒治疗，但该两类药物长期使用疗效欠佳，易于导致病毒突变，给治疗带来极大困难^[2]。

相对于抗病毒感染的药物，乙肝特异性的免疫球蛋白(HBIG)的抗病毒效果好很多。给予病人乙肝特异性的免疫球蛋白(HBIG)治疗已给被各国的学者广泛关注。诸如，HBIG在乙肝来源的肝癌后肝移植后的研究已达到很好的效果。HBIG是一种高效价的多克隆外源性抗体，其是从健康献血员中筛选出来，经过生物浓缩工艺制成。当人体感染HBV时被动地接受这种被动免疫制剂，可使机体能短期内迅速中和并清除血清中游离的乙肝病毒，避免乙肝病毒定位感染。

然而，当前HBIG作为治疗性抗体的来源存在诸多非安全因素。同时，乙肝免疫球蛋白成分复杂，危险因素相对不确定，生产方式受限，这些因素制约着乙肝治疗性抗体的临床使用^[3]。

因此迫切需要研发一种安全有效及危险因素相对可控的生物制品替代人乙肝免疫球蛋白，所以研发乙肝特异性人源基因工程抗体越来越受到关注。因单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高且易大规模生产等优点，故研发针对乙肝表面抗原(Hepatitis B surface Ag,HBsAg)的单克隆抗体，以期能够安全有效地中和HBV病毒，阻止HBV感染及其相关的肝炎、肝硬化及肝癌的进程。

发明内容

本发明利用Single cell RT-PCR单细胞抗体技术开发一株了抗乙肝表面蛋白的全人源单克隆抗体B₅H₆，采用了以下技术方案：