[发明专利]能够鉴定苏御糯的ISSR‑SCAR标记及其筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于本发明属于分子标记鉴定领域，特别涉及一种鉴定太湖名贵糯稻——苏御糯的特异性分子标记及方法。

背景技术

稻（Oryza sativa L.）属禾本科（Gramineae）稻属（Oryza），为一年生水生草本，是亚热带地区广泛种植的重要谷物。《中国植物志》将其分为2个亚种，分别为籼稻（Oryza sativa L. subsp. indica Kato）和粳稻（Oryza sativa L. subsp. japonica Kato）。我国是亚洲栽培稻起源地之一，稻作历史悠久，稻种类型繁多，其数量之多列世界之最。据统计，截止2003年，我国共编目稻种资源已达77541份。由于水稻资源数量众多，水稻品种鉴别一直是农业生产和作物育种等环节面临的重要难题。

以往对水稻品种的鉴别，主要包括形态鉴定法、物理鉴定法和生物化学鉴定法等。但这些鉴定方法往往容易受到发育时期、环境条件等因素干扰，因此寻求一种快速、稳定、准确的水稻品种鉴定方法极其重要。由于DNA水平上的分子标记能从本质上反应个体差异，具有个体特异性，并且不受内外环境的影响，不存在组织、生长阶段或季节性的差异，近年来在水稻品种的鉴定方面得到应用。但目前报道的通过DNA分子标记对水稻品种的鉴别大多通过构建DNA指纹图谱对其进行区分，该方法操作繁琐、重复性差，并且不是可直接应用的专一性、特异性分子标记，因此不适合用于稳定、快速、准确的品种鉴别体系的开发。

苏御糯是太湖地区栽培历史悠久的名贵农家品种，在历史上曾作为贡品敬献给历代帝王享用，在国内享有盛名。该品种具有粒大饱满，色泽白净，糯性适中，甘口软浓郁等特点，素有“一家煮食满村香”的美誉。在1984年江苏省第一届优质稻米品尝鉴定会上，经专家们评定，其外观品质和蒸煮品质综合评分在特色稻米类型中居首位。但苏御糯从形态上与其他水稻品种仍然较难区分，因此开发鉴定苏御糯的专一性、特异性鉴别的分子标记具有重要的科学意义。

本发明是首次对太湖名贵糯稻品种——苏御糯进行特异性鉴别分子标记的开发，本发明提供的鉴定苏御糯的特异性标记方法具有操作简单、灵敏度高、重复性好等优点，能够实现对太湖苏御糯品种的特异性鉴定，对于我国水稻的品种鉴别和种质资源保护均具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定太湖名贵糯稻——苏御糯的特异性分子标记，通过筛选能够在苏御糯中扩增出特异性条带的ISSR引物，并针对特异性条带设计序列特异性引物，最终将苏御糯和其它水稻品种区分开来，实现对太湖苏御糯的特异性鉴定，为水稻的品种鉴别和种质资源保护提供有力的技术支持。

本发明采用的技术方案是：

能够在苏御糯中扩增得到的特异性片段，该片段的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所述。

一组能够鉴别苏御糯的SCAR引物，该引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所述。

一种鉴别苏御糯的特异性分子标记的筛选方法，所述的方法包括如下步骤：

（1）采用32条ISSR引物对12个水稻品种进行扩增，得到1条苏御糯特异性片段；

（2）将步骤（1）中的特异性片段进行切胶回收并测序；

（3）针对步骤（2）中的序列设计序列特异性引物；

（4）用步骤（3）中的引物在所有水稻品种中进行单株验证；

（5）用步骤（3）中的引物在苏御糯和4个籼稻中进行扩增并测序；

（6）针对步骤（5）中的序列设计位点特异性引物；

（7）用步骤（6）中的引物在所有水稻品种中进行单株验证，得到仅在苏御糯中能扩增出特异性条带的引物。