[发明专利]一种快速制备鱼类PCR模板DNA的方法

权利要求书

1.一种快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样本预处理：将鱼卵或仔鱼捣碎；

2)加裂解液：向体系中加入DNA裂解液；

3)消化：将整个体系依次在53～57℃消化80～100min，93～97℃变性3～8min，4～8℃保持3～8min。

2.根据权利要求1所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，所述裂解液的成分及含量如下：10mmol/L的Tris-Cl、1mmol/L的EDTA、质量分数为0.5％的SDS、20mg/mL的ProteinaseK，余量为纯水。

3.根据权利要求1所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，在所述步骤1)样本预处理前，还包括样本的固定：将所述样本浸泡于无水乙醇中，在-20～25℃下保藏待用。

4.根据权利要求3所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，所述样本与所述无水乙醇的体积比为1:5～10。

5.根据权利要求3所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，在所述样本的固定和所述步骤1)之间，还包括固定液的去除：将所述样本用纯水清洗，滤水后用滤纸吸干，重复2～3次。

6.根据权利要求1～5任一所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，在3)消化过程中，使用PCR仪进行温度控制；使用PCR板作为样本的承载物，且在向PCR板中加入样本和裂解液后，用PCR封板膜密封，在PCR仪内进行3)消化。

7.根据权利要求6所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，在3)消化完成之后，还包括PCR模板DNA的检测。

8.根据权利要求7所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，所述PCR模板DNA的检测为：使用所述PCR模板DNA为模板，进行PCR扩增，对扩增结果进行电泳分析。

9.根据权利要求8所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min；然后25个循环，每个循环包括94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s；25个循环完毕后，最后72℃延伸10min。

10.根据权利要求8所述的快速制备鱼类PCR模板DNA的方法，其特征在于，所述电泳分析为8％聚丙烯凝胶电泳检测。