[发明专利]一种纯化百日咳杆菌Prn蛋白的免疫亲和层析柱及蛋白纯化方法

权利要求书

1.一种纯化百日咳杆菌Prn蛋白的多克隆抗体，其特征在于，是由百日咳杆菌Prn蛋白经免疫动物后采血，分离抗血清后纯化制得。

2.根据权利要求1所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的多克隆抗体，其特征在于：所述的动物是兔。

3.一种纯化百日咳杆菌Prn蛋白的免疫亲和层析柱，其特征在于：是由固相载体和与其偶联的权利要求1所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的多克隆抗体组成。

4.根据权利要求3所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的免疫亲和层析柱，其特征在于：所述固相载体为纤维素、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃、琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶。

5.根据权利要求3所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的免疫亲和层析柱，其特征在于：所述固相载体为CNBr活化的Sepharose4B。

6.权利要求3所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：第1步、Prn蛋白免疫动物后采血，分离抗血清后纯化制得多克隆抗体；第2步、将载体活化，与多克隆抗体进行偶联，得到免疫亲和层析柱。

7.一种纯化百日咳杆菌Prn蛋白的纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：

第1步、将百日咳菌株的培养上清液除去FHA与PT蛋白，再送入超滤膜中进行浓缩，再将浓缩液离心，收集上清液；

第2步、将上清液送入权利要求3所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的免疫亲和层析柱中，进行上样；

第3步、上样结束后，再用洗脱液进行洗脱，得到纯化蛋白。

8.根据权利要求7所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的纯化方法，其特征在于：所述的第1步中，超滤膜的截留分子量是30kD；在进行离心之前，需要用50mMTris-HCl、pH=7.5溶液进行复溶处理。

9.根据权利要求7所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的纯化方法，其特征在于：所述的第2步中，在将上清液上样前，需要先平衡层析柱，所用的平衡液为50mMTris-HCl、pH=7.5的溶液；上清液的体积是柱体积的4倍。

10.根据权利要求7所述的纯化百日咳杆菌Prn蛋白的纯化方法，其特征在于：所述的第3步中，洗脱过程是先用5倍柱体积的50mMTris-HCl、pH为7.5的溶液洗脱杂蛋白，再用50mMTris-HCl、pH为3.5缓冲液，洗脱Prn蛋白。