[发明专利]富集短链核酸的方法

权利要求书

1.一种富集长度小于300个核苷酸的核酸的方法，所述方法包括以下步骤：

i)提供流体相，优选水相，P₁，其中含有

(α1)至少一种长度小于300个核苷酸的核酸，和

(α2)至少一种不同于所述核酸(α1)的组分，

ii)使所述相P₁接触阴离子交换基质以使所述核酸(α1)结合于阴离子交换基质上，

iii)任选地用洗涤缓冲液洗涤所述阴离子交换基质，其中所述核酸(α1)仍旧结合于阴离子交换基质，和

iv)从所述阴离子交换基质上除去，优选洗脱，结合于阴离子交换基质的核酸(α1)以获得含有核酸(α1)的流体相，优选水相，P₂。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸(α1)是RNA。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述RNA选自下组：miRNA，前miRNA，siRNA，snRNA，snoRNA，tRNA，5S-rRNA，5.8S-rRNA，或其中至少两种的混合物。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述RNA是miRNA、前miRNA、tRNA或者miRNA和tRNA的混合物。

5.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述阴离子交换基质具有选自下组的官能团：氨基、膦基，肼基和亚胺基。

6.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述阴离子交换基质以颗粒、过滤器、膜、整料、微滴定板或其它反应容器上涂层的形式存在。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述颗粒是磁性颗粒，优选超顺磁性、亚铁磁性或铁磁性颗粒。

8.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述核酸(α1)在存在0.01-10mol/l NaCl时在方法步骤ii)中结合于所述阴离子交换基质。

9.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述洗涤缓冲液是不含RNA酶的水。

10.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，方法步骤iv)中的分离通过洗脱缓冲液进行。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液含有水溶性钙盐、水溶性镁盐、水溶性铵盐或其混合物。

12.如权利要求10或11所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液含有浓度为1-1000mmol/l的氯化钙。

13.如权利要求10-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液含有浓度为1-1000mmol/l的氯化镁。

14.如权利要求10-13中任一项所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液含有浓度为1-1000mmol/l的硫酸铵或氯化铵。

15.如上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，方法步骤i)中提供的水相P₁是细胞裂解物。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述细胞裂解物可通过包括以下步骤的方法获得：

I)提供细胞，

II)裂解细胞以获得细胞裂解物，和

III)任选地从所述细胞裂解物中至少部分地分离至少一种不同于核酸(α₁)的组分(α₂)。

17.如权利要求2-16中任一项所述的方法，其特征在于，基于所述相P₂中RNA总量的所述相P₂中长度小于300个核苷酸的RNA的相对量比基于所述相P₁中RNA总量的所述相P₁中长度小于300个核苷酸的RNA的相对量大至少2倍。

18.如权利要求4-17中任一项所述的方法，其特征在于，基于水相P₂中miRNA和tRNA总量的水相P₂中miRNA的相对量比基于水相P₁中miRNA和tRNA总量的水相P₁中miRNA的相对量大至少2倍。