[发明专利]一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，属于抗血清制备技术领域。

背景技术

小分子抗原指分子量在4KD-10KD之间，大于150KD为大分子抗原，胱抑素C(Cys-C)分子量较小为13KD，其表面面积相应较小，接触免疫细胞的机率少，且结合不牢固，其免疫原性不强；抗体产生还与分子结构有关，越复杂免疫原性越强，反之亦然；影响优质抗体产生还有很多因素。

目前，将人胱抑素C蛋白抗原与佐剂乳化后，按一定的程序免疫动物，可在动物血清中产生抗人的胱抑素C蛋白抗体。虽然目前的生产方法都可以产生一定量的抗体，但是抗体产生速度慢，水平较低，且抗原用量高。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供了一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法。

技术方案：为实现上述目的，本发明提供了一种生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，包括以下步骤：

(1)抗原准备：选用人胱抑素C蛋白抗原、用无菌PBS和弗氏佐剂制成免疫原乳剂，备用；

(2)第一次注射：使用上述免疫原乳剂对羊进行注射，注射部位为左右足底2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，总共12个注射点，平均注射；

(3)第二次注射：第一次注射后15天进行第二次注射，注射部位为左右腹股沟淋巴结内2点、左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计12个注射点，平均注射；

(4)第三次注射：第二次注射后9-11天进行第三次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；

(5)第四次注射：第三次注射后9-11天进行第四次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；

(6)第五次注射：第四次注射后9-11天进行第五次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；

(7)第六次注射：第五次注射后9-11天进行第六次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；

(8)第七次注射：第六次注射后9-11天进行第七次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；

(9)第八次注射：第七次注射后9-11天进行第八次注射，注射部位为左右腹股沟皮下4点、颈部两侧皮下2点、背部皮下4点，共计10个注射点，平均注射；

(10)取血清：第八次注射五天后对免疫的羊静脉采血，血液放入38.5℃水箱中1小时，待血清充分析出，经离心沉淀分离出抗血清，放至2～8℃冰箱保存；

(11)血清效价检测：取上述抗血清，检测效价。

作为优选，所述第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂。

作为另一种优选，所述第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。

作为另一种优选，所述第一次注射的剂量为每只羊0.25mg人胱抑素C蛋白抗原。

作为另一种优选，所述第二次注射的剂量为每只羊0.5mg人胱抑素C蛋白抗原。

作为另一种优选，所述第三次、第四次、第五次、第六次、第七次和第八次注射的剂量为每只羊1mg人胱抑素C蛋白抗原。

作为另一种优选，所述血清效价检测的方法为琼扩方法。

作为另一种优选，所述羊为土山羊。

本发明中羊可以选择土山羊、湖羊和杂交羊，优选土山羊；所述土山羊为长江三角洲白山羊；所述湖羊为太湖流域的一种产羔皮的多胎绵羊品种；所述杂交羊为波尔山羊为父本，土山羊为母本的杂交第一代羊。

本发明中弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体，引起淋巴结的肿大，加强对抗原的抗体反应。

此外，本发明通过特定抗原剂量、免疫时间、注射部位和注射次数，对羊进行免疫，最终得到较高的抗体水平。本发明重点是开始三次免疫中每只羊注射的抗原剂量成倍增加，以逐渐增强抗原对机体的刺激。

有益效果：相对于现有技术，本发明生产羊抗人胱抑素C蛋白抗血清的方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。

实施例1