[发明专利]羊布鲁氏菌胶体金抗体检测试纸条

说明书

技术领域本发明涉及一种羊布鲁氏菌胶体金抗体检测试纸条，属生物制品检测技术领域。

技术背景

布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌或称布鲁氏菌(Brucella)引起的以流产和发热为特征的人兽共患病，严重地威胁着人和多种动物的生命健康。本病不但对动物的繁殖和生产性能具有严重危害，更重要的是，人感染布鲁氏菌后，往往难以治愈，从而造成严重的公共卫生问题。因此在布鲁氏菌流行的国家，消除布病一直是公共卫生计划中最重要的目标之一。

布病在世界存在已有久远的历史，人类对该病的研究认识逐步加深，诊断水平不断提高，随着动物布病的研究进展，动物布病血清学的检测方法不断改进和提高。传统的凝集试验(如：虎红抗原平板凝集试验、试管抗原凝集试验、乳环凝集试验)逐渐被敏感性高、特异性强的ELISA方法、荧光偏振试验(FPA)等新的检测技术所取代。

凝集试验是布鲁氏菌病诊断的一种常用的方法，包括血清凝集实验、乳环沉淀试验和抗人免疫球蛋白试验，其中经典的标准试管凝集试验(STAT)、平板凝集试验(PAT)，以上方法在发达国家已经基本停止使用，取而代之的是缓冲布鲁氏菌抗原凝集试验如虎红平板凝集试验(RBPT)。虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养，灭活，离心收集菌体后用虎红染料染色后悬浮于乳酸缓冲液中制成，该方法灵敏度高，价格便宜，操作方便，检测快速，适于动物群体布鲁氏菌病的普查。在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。

在布鲁氏菌病血清学检验中一致认为补体结合试验(CFT)在特异性上优于其他方法，常被用来对试管凝集试验和虎红平板凝集试验检测为阳性或可疑的病例进行定性检测。补体结合试验一直被认为是最有效的布病诊断方法，至今尚没有一种诊断方法能取代补体结合试验在血清学诊断中的地位。但补体结合试验所需要的溶血素的制备困难，试验操作繁琐，难以在临床上普遍使用，而且由于猪体内的补体会干扰豚鼠补体的作用，导致敏感性下降。

ELISA是一种与CFT效果相当的诊断方法，该方法操作方便，灵敏度高，特异性较好，一次可以完成大量样品的检测，既可以作为筛选试验应用于动物群体检疫，还可以作为确诊试验。ELISA不仅可以应用于血清抗体的检测，还可应用于乳样中抗体的检测。牛的布鲁氏菌病ELISA检测方法已是国际贸易中指定的检测方法之一，其他种布鲁氏菌的ELISA检测方法也是研究的热点，但目前还没有商品化的羊布鲁氏菌间接ELSIA试剂盒。

上述各种布病检测方法各有其自身的特点，但存在的共同缺陷是以上各种检验都必须在实验室内完成。一般先分离血清，然后按照各种方法的操作程序进行实验室检验。而免疫胶体金技术克服了上述缺陷，可以直接采血后，滴加到胶体金试纸条加样孔内，现场就能判定是否为布鲁氏菌感染。

虽然已有相关胶体金发明专利的报道，如中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所王兴龙等、吉林大学闫广谋等(申请号:CN200710055740.5，CN200710055741.X，CN200810051726.2)采用以重组的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)作为金标抗体，由于SPA具有非特异性吸附IgG分子的能力，因此可用于对多种不同动物进行诊断，但对不同动物体内IgG吸附能力各不相同，因此对采用同一个试纸条对不同动物进行布病检测，其敏感性并不稳定。再如，杭州迪恩科技有限公司张明洲等(申请号:CN201310033074.0)，采用布鲁氏菌菌体抗原作为质控线包被抗原，再利用一种抗红细胞的单克隆抗体作为竞争用的单抗，吸附干燥的胶体金蛋白(流动带)，建立了夹心法检测牛布鲁氏菌抗原的检测试纸卡。但目前尚未有专门针对羊布病检测的胶体金试纸条。而羊在我国饲养量远远高于牛的饲养量，大约是牛总存栏量的5倍，当前我国布病的严峻防控形势与羊群较高的感染率是分不开的。因此开发适合基层使用的羊布病胶体金检测试纸条尤其必然的现实意义。

本发明以制备的光滑型布鲁氏菌S2株的脂多糖(LPS)作为测试线包被抗原(检测带)，以鼠抗羊IgGFc端的单克隆抗体标记胶体金制成胶体金抗体检测试纸条的金胶垫(流动带)，以兔抗鼠IgG抗体作为检测试纸条的质控抗原(质控带)，建立了羊布鲁氏菌胶体金抗体检测试纸条，研究表明本发明开发的试纸条具有良好的特异性、敏感性和稳定性。

本发明专利具有操作简单，结果快捷，易于判断和保存等优点，同时无需任何仪器设备，非常适合临床快速诊断，特别是基层农村和小规模养殖场的布病检测。

发明内容