[发明专利]一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗，包括抗原和佐剂，其特征在于，所述抗原为猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株的抗原浓缩灭活，配苗时每毫升疫苗中各菌株的菌数为2.0×10⁹CFU～3.0×10⁹CFU，所述佐剂为蜂胶乙醇浸出液和黄氏多糖，配苗时每毫升疫苗中蜂胶干物质含量为8mg，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株的抗原浓缩液、猪链球菌2型CVCC3307菌株的抗原浓缩液、蜂胶乙醇浸出液、黄氏多糖和注射用水之间的体积比为13～25:15～20:4～6:4～5：34～61。

2.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株抗原液灭活前活菌数在3.0×10⁹CFU/ml～4.0×10⁹CFU/ml之间。

3.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株的抗原液经4倍超滤浓缩。

4.如权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所用佐剂为优质蜂胶，经乙醇浸提获得。

5.一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)蜂胶乙醇浸出液制备：蜂胶在低温下贮存，使用时先将蜂胶置-15℃冷冻24-48h，再用冷冻粉碎机磨碎过筛，按1:4的比例加入95％乙醇，在37℃浸提48-72小时，冷却、过滤，即得纯净蜂胶乙醇浸出液(透明栗色溶液)，浸出液的蜂胶干物质含量不小于32g/ml；

2)制备生产用菌株：将猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株进行繁殖制备生产用菌株，并对该生产用菌株进行纯粹检验；

3)制备抗原液：将步骤2)的生产用菌株分别接种到相应的制苗用培养基培养，制备抗原液；并进行纯粹检验；

4)活菌计数：分别从步骤3)所获得的两种抗原液中取样，对猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株进行活菌计数，以确定培养的菌数；

5)超滤浓缩：将上述两种灭活的抗原液用超滤仪浓缩4倍，制得抗原浓缩液，制得抗原浓缩液含菌数在1.2×10¹⁰CFU/ml～1.6×10¹⁰CFU/ml。

6)灭活：两种抗原浓缩液经甲醛灭活制得灭活浓缩抗原液，并进行灭活检验；

7)疫苗成品完成：分别量取13000ml～25000ml猪链球菌2型CVCC3313菌株浓缩液，量取15000ml～20000ml 2型BHZZ-L4菌株浓缩液，量取4000ml～5000ml黄氏多糖，量取4000ml～6000ml蜂胶乙醇浸出液，按照每毫升疫苗中含蜂胶干物质8mg的标准量取蜂胶乙醇浸出液，浸出液的蜂胶干物质含量须不小于32g/ml，用注射用水补充至10万毫升；低速2000rpm搅拌15-20min，制得所述猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗。

6.如权利要求5所述的一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株抗原液灭活前活菌数在3.0×10⁹CFU/ml～4.0×10⁹CFU/ml之间。

7.如权利要求5所述的一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤7)的佐剂为蜂胶乙醇浸出液，所选蜂胶经乙醇浸提，制备蜂胶乙醇浸出液干物质含量≥32g/ml。