[发明专利]一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于动物疫苗制备技术领域，具体的说，是关于一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

猪链球菌病由溶血性链球菌感染引起，临床表现为急性出血性败血症、脑膜炎、心内膜炎、肺炎、关节炎等。其中猪链球菌2型致病性强、流行广，该型亦是临床分离频率最高的血清型。猪链球菌2型是一种重要的人畜共患病病原体，常引起断奶仔猪或育肥猪突然死亡；人类感染该菌，可导致脑膜炎，引发永久性耳聋、败血症、心内膜炎，甚至死亡。猪链球菌2型引起的猪链球菌病已经对我国的养殖业和人民健康构成了严重的威胁。

因此，需要开发一种猪链球菌病疫苗以解决上述问题。

发明内容

本发明的目的提供一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗，该疫苗副作用小，不含内毒素以及血清中不含杂蛋白，具有较好的免疫安全性。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

所述抗原为猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株的抗原浓缩灭活，配苗时每毫升疫苗中各菌株的菌数为2.0×10⁹CFU～3.0×10⁹CFU，所述佐剂为蜂胶乙醇浸出液和黄氏多糖，配苗时每毫升疫苗中蜂胶干物质含量为8mg，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株的抗原浓缩液、猪链球菌2型CVCC3307菌株的抗原浓缩液、蜂胶乙醇浸出液、黄氏多糖和注射用水之间的体积比为13～25:15～20:4～6:4～5：34～61。

根据本发明，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株抗原液灭活前活菌数在3.0×10⁹CFU/ml～4.0×10⁹CFU/ml之间。

根据本发明，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株的抗原液经4倍超滤浓缩。

根据本发明，所用佐剂为优质蜂胶，经乙醇浸提获得。

本发明还提供一种如上述任一项所述的猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

1)蜂胶乙醇浸出液制备：蜂胶在低温下贮存，使用时先将蜂胶置-15℃冷冻24-48h，再用冷冻粉碎机磨碎过筛，按1:4的比例加入95％乙醇，在37℃浸提48-72小时，冷却、过滤，即得纯净蜂胶乙醇浸出液(透明栗色溶液)，浸出液的蜂胶干物质含量不小于32g/ml；

2)制备生产用菌株：将猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株进行繁殖制备生产用菌株，并对该生产用菌株进行纯粹检验；

3)制备抗原液：将步骤2)的生产用菌株分别接种到相应的制苗用培养基培养，制备抗原液；并进行纯粹检验；

4)活菌计数：分别从步骤3)所获得的两种抗原液中取样，对猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株进行活菌计数，以确定培养的菌数；

5)超滤浓缩：将上述两种灭活的抗原液用超滤仪浓缩4倍，制得抗原浓缩液，制得抗原浓缩液含菌数在1.2×10¹⁰CFU/ml～1.6×10¹⁰CFU/ml。

6)灭活：两种抗原浓缩液经甲醛灭活制得灭活浓缩抗原液，并进行灭活检验；

7)疫苗成品完成：分别量取13000ml～25000ml猪链球菌2型CVCC3313菌株浓缩液，量取15000ml～20000ml 2型BHZZ-L4菌株浓缩液，量取4000ml～5000ml黄氏多糖，量取4000ml～6000ml蜂胶乙醇浸出液，按照每毫升疫苗中含蜂胶干物质8mg的标准量取蜂胶乙醇浸出液，浸出液的蜂胶干物质含量须不小于32g/ml，用注射用水补充至10万毫升；低速2000rpm搅拌15-20min，制得所述猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗。

根据本发明，所述猪链球菌2型CVCC3313菌株和猪链球菌2型CVCC3307菌株菌株抗原液灭活前活菌数在3.0×10⁹CFU/ml～4.0×10⁹CFU/ml之间。

根据本发明，步骤7)的佐剂为蜂胶乙醇浸出液，所选蜂胶经乙醇浸提，制备蜂胶乙醇浸出液干物质含量≥32g/ml。

本发明的猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗，其有益效果是：

1、降低猪链球菌引起的猪链球菌病，提高仔猪的存活率。

2、其免疫力高，且使用方便，减少仔猪的猪只应激，不存在散毒的隐患。