[发明专利]一种分选人细胞的免疫磁珠、其制备及切除方法

权利要求书

1.一种磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，所述复合物包含磁珠、共价偶联于磁珠上的核酸、以及与核酸共价偶联的抗体，其中，

所述核酸包含NotI和SalI的酶切位点；和

所述抗体能与外周血单个核细胞表面上的抗原特异性结合，且所述抗体选自：特异性识别CD3、CD14或CD45抗原的抗体。

2.如权利要求1所述的磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，其特征在于，所述磁珠-核酸-抗体复合物具有以下任意一个或多个或全部特征：

（1）所述磁珠表面带有反应性基团；

（2）所述磁珠的材料为Fe₃O₄或Fe₂O₃，粒径为10nm到10μm；

（3）所述核酸经由偶联剂与磁珠共价偶联；和

（4）所述抗体通过偶联剂与核酸共价偶联。

3.如权利要求2所述的磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，其特征在于，所述反应性基团为氨基或羧基。

4.如权利要求2所述的磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，其特征在于，所述偶联剂为戊二醛。

5.如权利要求1-4中任一项所述的磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，其特征在于，所述外周血单个核细胞为淋巴细胞。

6.如权利要求4所述的磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，其特征在于，

（i）所述磁珠通过戊二醛将其表面的氨基与核酸5’端的氨基共价结合形成磁珠-核酸复合物；和/或

（ii）所述核酸3’端的氨基通过戊二醛与抗体上的氨基共价结合。

7.如权利要求1－4和6中任一项所述的磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，其特征在于，所述磁珠-核酸-抗体复合物具有以下任意一个、任意两个或全部特征：

（I）所述核酸包含gcggccgc和/或gtcgac；

（II）所述核酸长50～150个碱基；和

（III）所述核酸3’端和5’端的一个或数个碱基选自胞嘧啶、腺嘌呤和鸟嘌呤。

8.如权利要求1－4中任一项所述的磁珠-核酸-抗体复合物或含该磁珠-核酸-抗体复合物的试剂盒，其特征在于，

所述磁珠的材料为Fe₃O₄或Fe₂O₃，粒径为100nm到2μm；

所述磁珠表面含有氨基官能团；

所述磁珠通过戊二醛将其表面的氨基与核酸5’端的氨基共价结合形成磁珠-核酸复合物；

所述核酸3’端的氨基通过戊二醛与抗体上的氨基共价结合；和

所述核酸含有gcggccgc和/或gtcgac，或者其序列如SEQ ID NO:1所示。

9.一种制备权利要求1－8中任一项所述的磁珠-核酸-抗体复合物的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）将表面带有反应性基团的磁珠与偶联剂孵育；

（2）将核酸与偶联剂孵育；

（3）将步骤（1）所得的偶联了偶联剂的磁珠和步骤（2）所得的偶联了偶联剂的核酸混合，孵育，获得共价偶联了核酸的磁珠；

（4）将抗体与步骤（3）所得的共价偶联了核酸的磁珠孵育，从而制备得到所述磁珠-核酸-抗体复合物。