[发明专利]一种分选人细胞的免疫磁珠、其制备及切除方法

说明书

本发明提供一种分选人细胞的免疫磁珠制备及切除方法。具体而言，本发明涉及一种磁珠‑核酸‑抗体复合物或含该磁珠‑核酸‑抗体复合物的试剂盒，所述复合物包含磁珠、共价偶联于磁珠上的核酸、以及与核酸共价偶联的抗体，其中，所述核酸包含至少一个酶切位点，且所述抗体能与待筛选细胞表面上的抗原特异性结合。本发明还包括所述磁珠‑核酸‑抗体复合物的用途及制备方法，以及使用所述磁珠‑核酸‑抗体复合物进行细胞分选的方法。

技术领域

本发明属于医学生物学实验技术领域，涉及一种分选人细胞的免疫磁珠、其制备及切除方法。

背景技术

肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一，手术、放疗、化疗等传统治疗方法已经难以杀灭体内残存的肿瘤细胞。21世纪，随着肿瘤治疗的科技进步，已发展进入生物治疗的技术系统。其中，生物治疗是目前最为成熟、应用最为广泛的肿瘤生物治疗方法。生物治疗就是从患者的外周血中采集单个核细胞(PBMC)，然后送到GMP工作室内进行培养、扩增、诱导、行肿瘤抗原刺激，从而获得能识别癌细胞的DC细胞和具有高杀瘤活性的CIK细胞，然后如同打点滴一样分次回输到患者体内，有效抑制肿瘤细胞生长、消除转移病灶，达到预防和控制肿瘤复发和转移的目的，实现延长患者生存期、提高患者生活质量的多重目标。

目前患者PBMC细胞提取多采用机器采集细胞之后进行Ficoll密度梯度离心法分离，从而得到高密度的PBMC细胞。但是由于该方法耗时较长，不利于后续细胞培养，并且收集到的PBMC细胞纯度80％，回收率80％左右，一定程度上造成了细胞的浪费。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供了一种新的通过制备带有抗体的免疫磁珠来进行分选人细胞的方法，分选过后可以通过酶切的方式将磁珠去除，从而提高目的细胞的纯度，也不影响后续细胞的培养，可以在临床及实验室方面大量推广。

为了实现上述目的，本发明提供了一种磁珠-核酸-抗体复合物，通过抗体特异性地识别细胞来达到分选的目的，再通过磁分离的方式将磁珠连同细胞一并分离处理，最后再通过高保真酶将磁珠-核酸-抗体复合物中的核酸切断，从而达到磁珠与细胞的分离。

本发明的磁珠-核酸-抗体复合物包含磁珠、共价偶联于磁珠上的核酸、以及与核酸共价偶联的抗体，其中，所述核酸包含至少一个酶切位点，且所述抗体能与待筛选细胞表面上的抗原特异性结合。

在一个具体实施方式中，所述磁珠表面带有反应性基团，例如氨基或羧基。

在一个具体实施方式中，所述磁珠的材料为Fe₃O₄或Fe₂O₃，粒径为10nm到10μm。

在一个具体实施例中，所述磁珠的材料为Fe₃O₄或Fe₂O₃，粒径为100nm到2μm。

在一个具体实施方式中，所述核酸经由偶联剂与磁珠共价偶联。

在一个具体实施方式中，所述抗体通过偶联剂与核酸共价偶联。

在一个具体实施方式中，所述偶联剂为戊二醛。

在一个具体实施方式中，所述核酸为单链或双链DNA，所述酶切位点可被限制性内切酶或核酸酶酶切断裂。

在一个具体实施方式中，所述抗体识别选自以下的细胞的表面抗原：外周血细胞、造血细胞、神经干细胞和肿瘤细胞。

在一个具体实施方式中，所述磁珠通过戊二醛将其表面的氨基与核酸5’端的氨基共价结合形成磁珠-核酸复合物。

在一个具体实施方式中，所述核酸3’端的氨基通过戊二醛与抗体上的氨基共价结合。