[发明专利]TBC人工免疫原TBC-BSA及其制备和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种TBC人工免疫原TBC-BSA及其制备和用途，具体是一种用于新兴持久性有机污染物——三(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯免疫检测的TBC人工免疫原TBC-BSA及其制备方法和用途。

背景技术

溴代阻燃剂(BrominatedFlameRetardant，BFRs)，指能使聚合物不容易着火或者着火后使其燃烧变慢的一种助剂，是目前世界上产量和用量最大的有机阻燃剂之一。随着多种溴代阻燃剂逐渐在多数国家和地区被禁止生产使用，新的溴代阻燃剂产品被逐渐开发生产出以填补市场空白，三(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯(Tris(2,3-dibromopropyl)isocyanurate,TBC)就是新溴代阻燃剂的一个代表。TBC是溴代阻燃剂中的一种，分子结构中含有六个溴原子，也属于三嗪系列阻燃剂。作为阻燃剂的新品种，TBC具有优异的阻燃性能、热稳定性、不易光解、低发烟性等优点，被广泛用于纤维增强塑料、农用聚氨酯薄膜、聚烯烃、聚氯乙烯(PVC)、聚苯烯、ABS树脂不饱和聚脂、合成橡胶和合成纤维等制品中。在上述材料或产品中，TBC阻燃剂的含量一般在5-10％w/w。我国从二十世纪八十年代中期开始生产、使用TBC产品，生产厂家集中在东南沿海和长江流域。

TBC阻燃剂也有溴代阻燃剂的不足，并存在一定的环境问题：如裂解时会释放出有毒气体溴化氢，溴化氢易吸收空气中的水分形成氢溴酸，具有很强的腐蚀性，存在二次危害。生物富集性和大气自由基氧化半衰期结果显示TBC具有与持久性有机污染物相类似的持久性、长距离传输性和可生物富集性等理化特性，并可通过血脑屏障富集于脑组织中。虽然现阶段TBC的生产使用并未被施加任何限制，但它已被纳入加拿大环境威胁生态物质(LowerEcologicalConcern)筛选名录中，作为一种高优先级化学品识别。

目前，关于TBC的研究主要集中在水体、沉积物、大气等环境领域和生物体的毒性方面，但样品的检测方法方面研究较少。目前对三(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯的检测手段主要为气相色谱和高效液相色谱等仪器检测方法，这些方法虽然准确可靠，但对样品的预处理方法和操作人员的专业性有很高的要求。正因为这些方法的处理复杂、耗时、仪器价格昂贵而不适合推广使用，也不利于在环境污染事故现场快速检测。为克服这些缺点，寻求一种快速、简便、灵敏且经济实用的分析方法就成为环境监测领域的主要研究方向。因此，开展研究并建立有效、可靠的含溴阻燃剂的检测方法及标准，并通过相关的法规予以保障，成为一项极为重要和迫切的工作。

20世纪60年代发展起来的免疫分析是基于抗原和抗体的特异性、可逆性结合反应的分析技术。免疫分析具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高灵敏性，非常适合复杂介质中痕量组分的分析。因此免疫分析具有的特异性强、灵敏度高、方法快捷简单、分析通量大、检测成本低等优点，使得该类方法可以满足简单、快速、灵敏地检测持久性有机污染物的要求。1985年美国Cetus公司的K.B.Mullis和R.K.Saiki等发明了一种特异性DNA体外扩增技术，成为PolymeraseChainReaction，简称PCR，即聚合酶链式反应。1992年Sano等将免疫分析技术与PCR技术结合，发展出荧光免疫PCR技术。荧光免疫PCR技术兼具了免疫分析的特异性强和PCR技术的灵敏度高(检测限高达10^-11～10^-12g/L)的特点，可用于检测环境中痕量污染物。

目前，尚无用荧光免疫PCR技术检测TBC的相关报道。而制备合格的TBC人工免疫原是生物免疫得到高特异性抗TBC抗体的前提，更是建立TBC免疫检测分析方法的关键，这将具有重要的应用价值和理论研究意义。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种步骤简单，速度快，产率高的三(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯人工免疫原(TBC-BSA)制备方法，为免疫得到特异性抗体和利用人工抗原、抗体建立免疫检测方法奠定基础。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种三(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯的人工免疫原TBC-BSA，结构式如式(Ⅰ)所示：

式(Ⅰ)；BSA为牛血清蛋白。

本发明还提供了一种三(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯的人工免疫原TBC-BSA的制备方法，包括以下步骤：

采用戊二醛法将TBC半抗原与蛋白质分子BSA偶联制备人工免疫原TBC-BSA。

优选地，所述TBC半抗原的制备方法包括如下步骤：