[发明专利]基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对电极进行预处理，取金电极，在0.3μm和0.05μm的氧化铝浆中进行抛光处理，直到呈镜面，用PBS冲洗和二次水冲洗；

(2)将10μM的HAP2取10μL滴加到经过预处理的电极表面，在37℃下孵育2h；

(3)将灭菌水，Aptamer、Primer和待测目标物加入离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育1h；再将10×的buffer缓冲液、HAP1、Helper、dNTP、聚合酶和内切酶加入以上离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育2h；将孵育好的混合溶液滴加到修饰好HAP2层的电极上，将电极继续放在37℃的恒温箱中孵育2h，清洗；

(4)以Ag/AgCl为参比电极，以Pt电极为对电极，电位设置为0到-0.5V，脉冲宽度0.05V，扫描速率为0.06S，采用差分脉冲伏安技术读取MB电信号的变化，检测待测目标物；

所述PBS为缓冲液，由10mM Na₂HPO₄，10mM NaH₂PO₄,140mM NaCl,1mM KCl,1mM MgCl₂,1mM CaCl₂组成，最终溶液的pH值为7.4；

所述的HAP1、HAP2、Primer、Aptamer、Helper、聚合酶、内切酶和dNTP的摩尔与活性的比为1摩尔：10摩尔：1摩尔：1摩尔：1摩尔：40U：40U：2摩尔；

所述聚合酶为Phi29DNA聚合酶；

所述内切酶为Nt.BsmAI内切酶；

HAP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

HAP2的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

Helper的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。