[发明专利]基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法

说明书

本发明涉及一种基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法，本发明通过Primer的不断产生和循环利用来实现信号的放大，从而实现鼠伤寒沙门氏菌的高灵敏检测，并获得较低的检测下限。本发明制备的生物传感器特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器。通过这种检测方法，沙门氏菌检测限在5‑15cfu/mL，检测范围是1×10‑1×10⁷ cfu/mL。

技术领域

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器，还涉及其制备方法。

背景技术

沙门氏菌是肠杆菌科重要的食源性致病菌之一，在我国食物中毒病例中占有较高比率。鼠伤寒沙门氏菌因其耐药性强、传播途径广、侵染宿主多等特点，被广泛关注。研究表明鼠伤寒沙门氏菌具有极强的多重耐药性，对多数抗生素均表现出抵抗能力。调查中，鼠伤寒沙门氏菌感染数量占当年沙门氏菌感染总量的17％。同时，在我国境内已发现的290余种沙门氏菌血清型中,鼠伤寒沙门氏菌也是最常见的血清型之一。

目前，主要用来检测鼠伤寒沙门氏菌的方法包括生化鉴定和血清分型。但此方法存在自身不可避免的缺点与限制，需经过增菌培养、选择筛选、生化鉴定、血清分型等流程,耗时一周左右,不利于快速、准确地对食品中的鼠伤寒沙门氏菌进行检测。因此,有必要建立一种高效快速检测鼠伤寒沙门氏菌的新方法。

发明内容

为了解决以上现有技术中检测鼠伤寒沙门氏菌的方法特异性和灵敏度都比较低、成本高的问题，本发明提供了一种特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器。通过这种检测方法，沙门氏菌检测限在5-15cfu/mL，检测范围是1×10-1×10⁷cfu/mL(cfu为菌落总数)。

本发明还提供了基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器的制备方法。

本发明是通过以下步骤得到的：

本发明中一共用到了5条DNA链，分别是：HAP1、HAP2、Primer、Aptamer、Helper。

其序列分别为：

HAP1：5’-AGTAATGCCCG AAAA GGAAAAGA GGAGAC TTTT CGGGCATTACT CGTACAAGTAATGCC ATAA-3’(SEQ ID NO:1)；

HAP2：5’-SH-AGCCA GTCTCAG GGAAAAG TGGCT-MB-3’(SEQ ID NO:2)；

Primer：5’-TCTTTTCC TTTTCGGGCATTACT-3’(SEQ ID NO:3)；

Aptamer：5’-AGTAATGCCCG GTAGTTATTCAAAGATGAGTA GGAAAAGA-3’(SEQ ID NO:4)；

Helper：5’-AGTAATGCCCGAAAACTGAGAC-3’(SEQ ID NO:5)。

Aptamer是目标物鼠伤寒沙门氏菌的适配体，可以与目标物特异性的识别并紧密结合。其中5’端(斜体部分)和3’端(黑体部分)分别与Primer的3’端(斜体部分)和5’端(黑体部分)杂交，当有目标物存在时，Aptamer会优先于目标物结合从而释放Primer。