[发明专利]一种同时检测乳制品中双氰胺和三聚氰胺含量的方法

权利要求书

1.一种同时检测乳制品中双氰胺和三聚氰胺含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）标准溶液制备：先分别制备双氰胺和三聚氰胺标准储备液；再将两种储备液混合稀释为标准混合溶液；最后将标准混合溶液进行梯度稀释，得到标准混合工作溶液系列；

（2）待测样品处理：将待测样品溶解于水中，加入蛋白质沉淀剂，涡旋、离心得到上清液，加入除脂剂后涡旋、离心，弃除脂剂层，在清液中加入净化包，涡旋、离心得上清液，最后经微孔滤膜过滤，得到待测液；

（3）采用高效液相色谱-串联质谱法进行检测，将步骤（1）所述的标准混合工作溶液系列和步骤（2）所述的待测液分别进样，先制作标准曲线，根据标准曲线和所述待测液的进样结果来计算双氰胺和三聚氰胺的含量；其中：

色谱条件为：

色谱柱：C₁₈，150mm×2.1mm×5μm；

流速：0.2 mL/min；

柱温：25℃；

进样量：5 μL；

流动相A： 10mmol/L乙酸铵水溶液用乙酸调节pH至3.0，流动相B：乙腈；梯度洗脱，洗脱程序为：

质谱条件为：

电喷雾电离源（ESI）；

扫描方式：正离子扫描；

检测方式：多反应监测（MRM）；

电喷雾电压：500 V；

干燥气温度：325℃；

干燥气流量：6 L/min；

鞘气温度：380℃；

鞘气流量：10 L/min；

毛细管电压：3500 V；

质谱参数为：

名称[M+H]⁺离子峰锥孔电压（V）定量离子（碰撞能量）定性离子（碰撞能量）双氰胺85.22368.1（17）43.1（13）三聚氰胺127.19785.1（18）68.1（34）

。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测乳制品中双氰胺和三聚氰胺含量的方法，其特征在于步骤（1）所述标准溶液制备的方法为：准确称取双氰胺和三聚氰胺标准品各25.0mg，用甲醇分别溶解定容至25.0mL，得到1000 μg/mL的标准储备液；移取所述标准储备液各1.0mL混合，用去离子定容至100mL，制成10 μg/mL的标准混合溶液；最后用阴性乳制品基质溶液进行梯度稀释，得到标准混合工作溶液系列。

3.根据权利要求1或2任一所述的一种同时检测乳制品中双氰胺和三聚氰胺含量的方法，其特征在于所述的标准混合工作溶液系列中双氰胺的质量浓度为1～209 ng/mL，三聚氰胺的质量浓度为2～420 ng/mL。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测乳制品中双氰胺和三聚氰胺含量的方法，其特征在于所述的蛋白质沉淀剂为乙腈、5%氨化乙腈。