[发明专利]一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV‑45‑OTS含量的方法

说明书

技术领域

一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法，属于分析化学技术领域。

背景技术

随着中国人口老龄化，阿尔茨海默病(AD)逐年增多，成为老年人中继脑血管病之后的第二常见的神经科疾病，严重影响老年人的晚年生活质量，给社会及家庭带来巨大的经济负担。AD 的发病机制不明，目前没有治愈药物。只有早期作出正确诊断，采取有效措施延缓病情，才能改善老年人的生活质量、减少社会和家庭压力。目前临床认为β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ) 聚集是AD的主要病理特征。国外采用功能显像脑内Aβ蛋白斑块聚集进行早期AD诊断。目前FDA批准用于临床的Aβ蛋白斑块显像试剂药盒¹⁸F-AV45由美国Avid 公司研制，它能够特异性结合Aβ斑块，通过正电子发射断层(PET)显像可以显著区别AD患者和认知健康的志愿者，从而可以早期诊断AD。

¹⁸F-AV45是由标记前体(E)-2-(2-(2-(2-对甲苯磺酰氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-5-(4-叔丁氧羰基甲基氨基苯乙烯)吡啶（AV-45-OTS）经¹⁸F标记制备而成。

高纯度的试剂盒是PET临床诊断用药的关键。要获得高放化纯的PET显像剂¹⁸F-AV-45，除了控制标记条件外，另一个关键之处是在合成标记前体（AV-45-OTS）中严格控制前体的纯度，包括反应中间体（AV-45-OH）的含量，才能获得高纯度的试剂盒。本发明的目的是建立一种简单方便的胶束毛细管电泳方法测定AV-45-OTS的含量，为药盒的质量控制提供有效的分析手段，相关研究未见报道。

文献报道的HPLC法分析AV-45含量，采用乙腈:醋酸胺(85:15)为流动相，峰型存在拖尾现象，峰较宽，不能将杂质有效地分离。改良的HPLC法采用磷酸盐作缓冲剂，添加三乙胺改善了拖尾现象，但盐溶液对色谱柱和仪器的使用有很高的要求。由于AV-45-OTS结构中含BOC（叔丁氧羰基保护基）和OTS（对甲苯磺酰基）两个保护基团，使得分子结构极性大大降低，普通的高效液相色谱等分析方法较难达到理想的分离。

发明内容

本发明的目的提供一种采用胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法。是建立一种简单方便的毛细管电泳方法测定AV-45-OTS的含量，为药盒的质量控制提供有效的分析手段，相关研究未见报道。

采用胶束毛细管电动色谱（MECC），以表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）加入到硼砂缓冲液体系形成胶束，提高了分离度，达到了高效快速的分离检测。

本发明的技术方案：一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法，胶束毛细管电泳分析条件：检测波长为254nm，紫外检测，进样方式为10kv电压进样，进样时间8～16s，分离电压为22kv，毛细管柱温25℃，运行缓冲液为：25mmol/L硼砂-10mmol/LSDS，pH=9.0，缓冲液及样品溶液均用0.22µm微孔针头过滤器过滤；

选用未涂层的45cm×50µm石英毛细管柱；新毛细管柱先依次用甲醇冲洗10min，蒸馏水冲洗5min，1M NaOH溶液冲洗30min，蒸馏水冲洗5min，最后再用运行缓冲液冲洗15min；进样前依次用蒸馏水及运行缓冲液各冲洗2min；

精密称取样品AV-45-OTS 1mg溶于0.5mL色谱纯四氢呋喃+1.5mL 25mmol/L硼砂-10mmol/L SDS溶液中，10kv电压进样，保持电压不变，改变进样时间，分别为8s、10s、12s、14s、16s，进样时间越长则进样体积越多，重复进样三次，以峰面积对进样时间进行线性回归，结果在进样时间为8～16s的范围内线性关系良好，回归方程为y=112958x-525878，相关系数r²= 0.9909。

取干燥恒重的对照品AV-45-OTS适量，精密称定，用0.5mL色谱纯四氢呋喃溶解+1.5mL 25mmol/L硼砂-10mmol/L SDS配制成AV-45-OTS 0.5mg/mL的溶液，计为W对照，作为对照溶液；另称取样品适量，相同方法配制成含被测AV-45-OTS样品0.5mg/mL的溶液，计为W样品，作为被测样品溶液；按上述色谱条件测定，所得峰面积分别为S对照、S样品，按外标法计算被测样品中AV-45-OTS的含量为：（S样品/S对照）×（W对照/W样品）×100%。