[发明专利]一种良附类制剂的HPLC检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物质量控制方法技术领域，具体涉及一种良附类制剂的质量检测方法。

背景技术

良附丸首载于清·谢元庆之《良方集腋》，是由高良姜、醋香附两味中药等份、粉碎、混合而制成的水泛丸，为治疗寒凝气滞胃脘疼痛的代表制剂，在中医临床应用已有近千年的历史。作为典型的中药复方传统制剂，良附丸药味组成固定，制备工艺简单，临床疗效显著，极具开发的潜力。

作为一种中药复方制剂，良附丸具有多成分、多靶点、多层次、整体作用的特点，但中国药典2010年版一部中仅测定了α-香附酮的含量，对于良附丸中的其他成分并没有进行检测。

因此，目前需要一种能全面反映良附类制剂质量的检测方法。

发明内容

本发明提供了一种良附类制剂的HPLC检测方法，它是同时测定良附类制剂中高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮5种成分含量的HPLC方法，包括以下步骤：

(1)高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮标准曲线的建立：

a、对照品溶液的制备：

取高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮对照品，混合，加甲醇配制成混合对照品溶液；

b、对照品溶液的测定：

取不同进样量的混合对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，测定各色谱峰峰面积，得到高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的标准曲线；

色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填料；

检测波长：242nm；

流动相：甲醇-0.2％磷酸水溶液；

梯度洗脱程序：

(2)待测样品中的高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮含量测定：

c、供试品溶液的制备：

取待测良附类制剂或其粉末，加入提取溶媒，称定重量，超声或回流提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的质量，过滤，取滤液作为供试品溶液；所述提取溶媒选自乙醇或50％-100％甲醇，优选100％甲醇；

d、供试品溶液的测定：

取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，以步骤b相同的色谱条件检测，根据步骤(1)的标准曲线得到待测样品中高良姜素、山柰素、香附烯酮、圆柚酮和α-香附酮的含量。

进一步优选地，步骤a中，所述对照品溶液中，每1mL溶液含高良姜素0.254mg、山柰素0.032mg、香附烯酮0.051mg、圆柚酮0.005mg和α-香附酮0.021mg。更进一步优选地，步骤b中，所述不同进样量的混合对照品溶液分别为2、4、6、8、10μL。

进一步优选地，所述步骤c中，提取溶媒与良附类制剂或其粉末的体积重量比为25:1mL/g。

进一步优选地，所述色谱柱的长度为250mm，内径为4.6mm，填料的粒径为5μm。更进一步优选地，所述色谱柱为Phenomenex C18色谱柱

进一步优选地，所述色谱条件的柱温为30℃。

进一步优选地，所述色谱条件的体积流量为1.0mL/min。

进一步优选地，所述良附类制剂包括良附丸、良附滴丸或良附软胶囊。

本发明的HPLC检测方法，可以同时测定良附类制剂中的多种成分。该方法专属性强、信息反映全面，简便、快速、精确，测定结果准确可靠，从而可以有效监控良附类制剂的质量，提高了药物的安全性。

发明人通过研究发现，α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮均是醋香附的含量较高且药效显著的特征活性成分，可以作为醋香附的指标成分。

在高良姜中，其活性成分较多，包括原儿茶酸、槲皮素、山柰素(kaempferide)、山柰酚(kaempferol)、高良姜素(galangin)、姜黄素和大黄 素等，通常，高良姜素是高良姜的特征性成分且其含量较高，可以作为高良姜的指标成分；发明人意外地发现，山柰素含量实际上远高于山柰酚，在特定条件下，以山柰素作为附加的指标成分来控制含有高良姜的制剂的质量显然更为合适。

但是，软件ChemBioDraw Ultra(12.0版)分子模拟显示，高良姜素LogP(疏水常数)为1.13，山柰素LogP为1，两者极性相当，理论上极难通过HPLC将两者分离。因此，分离高良姜素和山柰素是发明人需要攻克的一大难点，需要反复试验来摸索出合适的色谱条件。在色谱条件的摸索过程中，需要使用正确的山柰素对照品。