[发明专利]基于环介导等温扩增技术检测胡萝卜软腐果胶杆菌的方法、其引物组合物及检测试剂盒有效
| 申请号： | 201510493403.9 | 申请日： | 2015-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN105018631B | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 石延霞;晋知文;李宝聚;谢学文;柴阿丽 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京君智知识产权代理事务所(普通合伙) 11305 | 代理人： | 黄绿雯 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 环介导 等温 扩增 技术 检测 胡萝卜 软腐 果胶 杆菌 方法 引物 组合 试剂盒 | ||
1.用于检测胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)的引物组合物，其特征在于所述引物组合物由以下组成：
正向内引物FIP:5’-CCTGAGAGCCGGCTTTCAGCTGCTGACGCCGAAAGAGT-3’，
反向内引物BIP:5’-CCTGGAACGATGACCCGTCTTCCTTGTGACGCAGATTGTGGA-3’，
正向外引物F3:5’-GCTGGATGACAAGCCAGTG-3’，
反向外引物B3:5’-CGGATGCGGTCTTTCCCTA-3’，
环引物LOOP:5’-ACCAGGCGGGACAGTATCG-3’。
2.权利要求1所述的引物组合物在环介导等温扩增反应中检测软腐果胶杆菌的应用。
3.胡萝卜软腐果胶杆菌的环介导等温扩增反应检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒含有根据权利要求1所述的引物组合物。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含检测溶液以及荧光染料；其中，所述检测溶液含有40μM正向内引物FIP、40μM反向内引物BIP、5μM正向外引物F3、5μM反向外引物B3、20μM环引物LOOP、0.23mM dNTPs、0.83mM pH8.8Tris－HCl、0.41mM KCl、0.33mM MgSO4、0.41mM(NH4)2SO4、33.3mM三甲铵乙内酯、0.2wt％Tween20、8U Bst DNA聚合酶。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述荧光染料是钙黄绿素。
6.权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于对胡萝卜软腐果胶杆菌DNA样本的检测灵敏度达到1.92×10-3ng/μl，或对胡萝卜软腐果胶杆菌菌悬液的检测灵敏度达到1.27×104cfu/ml。
7.一种检测胡萝卜软腐果胶杆菌的方法，其特征在于取待检微生物DNA或菌悬液，以该DNA或菌悬液为模板，通过权利要求4所述的试剂盒进行环介导等温扩增。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于环介导等温扩增反应条件为63℃，60min。
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