[发明专利]一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法。

背景技术

抗菌肽(antibacterialpeptide，ABP)是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分。抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性高、安全高效等诸多优点，食物源蛋白抗菌肽的制备成为生物领域的研究热点之一。

猪血是生猪屠宰加工过程中的主要副产物之一，营养价值很高，素有“液态肉”之称，我国猪血资源非常丰富，但利用率低，不超过10％，如被加工成血粉作为饲料添加剂，用于生化制药中血红素、蛋白胨的生产，这些产品附加值低，而大多数作为废弃物直接排出，造成了资源浪费和环境污染。

欧美、日本等发达国家将猪血开发成肽类试剂、肽类药物等多种功能食品及食品添加剂，普遍推广，利用率达50％以上。因此，以猪血为底物开发生物活性肽，可以提高生猪屠宰加工企业产品附加值，显示出巨大的市场前景。

研究表明，猪血中具有较强抗菌活性的多肽，因此开发研究一种从猪血中提取、纯化抗菌肽的成熟方法，可以一举多得。目前从猪血中提取抗菌肽的技术方法和产品尚未见报道。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种成本低、效果好的利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法。

本发明为达到以上目的，是通过这样的技术方案来实现的：提供一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法，包括以下步骤：

（1）采集新鲜猪血，以5g／L的柠檬酸钠抗凝，在4℃、8000r／min离心10min，收集下层沉淀，以获得红血球；在红血球中加入同等体积的蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4℃、4000r／min离心10min，得到血红蛋白溶液，于4℃保存备用。

（2）取适量血红蛋白溶液，加入胰蛋白酶酶解（加酶量2500-3500U／g），搅拌，1mol/LNaoH溶液或HCl溶液维持体系pH8.0，45-55℃，4-6h；将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度10～15分钟，再迅速冷却至0～30℃以终止酶解反应，调节pH值至7.0左右，8000r／min离心15min，获得上清酶解液，4℃冷藏备用。

（3）活性炭用量为酶解液总重的5-30％，温度55℃，搅拌脱色20-30min；再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1～0.2Mpa的工作压力和0～45℃的工作温度下，采用截留分子质量为10kD超滤膜进行超滤处理，以除去大分子蛋白类物质，得超滤酶解液；再将超滤酶解液依次进行真空浓缩、冷冻干燥，得抗菌肽，-20℃保存。

以上所述的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是：所述步骤（2）中胰蛋白酶是酶比活力10×10⁴u/g；胰蛋白酶加酶量是3000U／g。

本发明的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法，具有如下优点：

1.本发明所制备的抗菌肽是猪血红蛋白经生物酶水解而得，属于天然提取物，具有天然、无毒、无污染、无残留、无副作用、高效抗菌等特点，是一种新型的绿色抗微生物药物。

2.采用本发明方法提取的抗菌肽，具有广谱抗菌、抗病毒、不产生耐药性、有免疫调节作用等功能。

3.本发明所采用的原料来源广泛，价格低廉，经过本发明的技术转化可以有效的提高猪血副产物的附加值，对继续促进生猪产业的发展有重要的意义。

4.本发明的产品可以作为药品、保健食品、食品、食品添加剂、药物增效剂等，工艺科学合理，操作简单，具有较强的工业实施性。

具体实施方式

实施例1

（1）采集新鲜猪血100L，以5g／L的柠檬酸钠抗凝，在4℃、8000r／min离心10min，收集下层沉淀，以获得红血球约45L（固含30%）；在红血球中加入45L蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4℃、4000r／min离心10min，得到血红蛋白溶液90L。

（2）取适量血红蛋白溶液，加入410g胰蛋白酶酶解（酶比活力为10×10⁴u/g），搅拌，1mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0，50℃，5h；将酶解反应产物迅速升温至85℃并保持此温度15分钟，再迅速冷却至0～30℃以终止酶解反应，调节pH值至7.0左右，8000r／min离心15min，获得上清酶解液90L。