[发明专利]一种通过纳米金颗粒介导基因转染诱导人脐带间充质干细胞分化为睾丸间质细胞的方法

权利要求书

1.一种通过纳米金颗粒介导基因转染诱导人脐带间充质干细胞分化睾丸间质细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：

纳米金颗粒的合成，纳米金颗粒对基因载体的包被，纳米金颗粒介导的基因转染；

采用化合物或生长因子诱导人脐带间充质干细胞定向分化为睾丸间质细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述纳米金颗料为直径10-30nm的纳米胶体金颗粒。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述纳米金颗料为直径20nm的纳米胶体金颗粒。

4.如权利要求1所述的方法，其他在于：所述纳米金颗粒的合成过程为：

(1)将氯金酸(HAuC14)配制成0.01％水溶液，取100mL加热至沸；

(2)搅动下准确加入1.5mL的1%柠檬酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）水溶液；

(3)继续加热煮沸15min，此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色，随后逐渐稳定成红色，全过程2－3min；

(4)冷却至室温后用蒸馏水恢复至原体积备用。

5.权利要求1所述的方法，其特征在于：所述纳米金颗粒对基因载体的包被，纳米金颗粒介导的基因转染过程为：

将人脐带间充质干细胞进行常规贴壁培养，按6孔培养板中每孔4×10⁵个细胞，并按以下试剂量操作：取两种待转质粒(分别含类固醇生成因子1基因和促黄体生成激素受体基因)各2μg溶于100μlPBS缓冲液，再加入16μl纳米金颗粒溶液，涡旋1s混匀，室温放置2-5min后加入细胞中；转染24小时更换培养液后换成诱导培养液。

6.权利要求1或5所述的方法，其特征在于：所述采用化合物或生长因子诱导人脐带间充质干细胞定向分化为睾丸间质细胞，诱导培养基为：在基础培养基中添加5×10^-7mol/L维Ａ酸和1×10^-3mol/L8-溴-环磷腺苷。