[发明专利]一种高产普鲁兰酶的重组短小芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种高产普鲁兰酶的重组菌，其特征在于，所述重组菌以短小芽孢杆菌为宿主，通过重组质粒pulA/pSVEB表达来源于脱支芽孢杆菌的普鲁兰酶；

所述重组质粒pulA/pSVEB是将缺失了启动子和信号肽的pWB980、普鲁兰酶表达元件、缺失了信号肽的pET20b(+)连接成环得到的；所述普鲁兰酶表达元件的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述重组菌的构建方法，其特征在于，所述方法是：(1)按照缺失了启动子和信号肽的pWB980、SEQ ID NO.1所示的普鲁兰酶表达元件、缺失了信号肽的pET20b(+)的顺序，将这三段核苷酸序列用In-Fusion酶连接，得到重组质粒pulA/pSVEB；(2)将重组质粒pulA/pSVEB电转至短小芽孢杆菌Brevibacillus brevis CCTCC AB94025中，得到重组菌pulA/pSVEB/Brevibacillus brevis。

3.一种权利要求1所述重组菌生产普鲁兰酶的方法，其特征在于，所述方法是将重组菌种子液接种至发酵培养基，于25-37℃发酵培养；所述发酵培养基中含有葡萄糖10-50g/L，棉籽粉1-10g/L，牛肉浸膏10-30g/L，MgCl₂·6H₂O 1-20g/L和卡那霉素。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法是将重组菌种子液接种至发酵罐，控制温度25-37℃、溶氧10-50％、pH5.0-7.0，并流加葡萄糖维持发酵液中残糖浓度为1-30g/L。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法是将培养好的种子液接入装有发酵培养基的发酵罐中，控制在30℃、pH为7.0±0.1、通风量1.0vvm、溶氧为30％、残糖浓度在5g/L以上，培养72h；其中发酵培养基为：葡萄糖30g/L，牛肉浸膏30g/L，棉籽粉5g/L，MgCl₂·6H₂O 12g/L和卡那霉素。