[发明专利]八角莲的快速繁殖方法

权利要求书

1.一种八角莲的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：制作八角莲的无菌外植体，获得无菌外植体的步骤为：选取八角莲的叶片或根或茎作为外植体，将所述外植体置于烧杯中，用两性表面活性剂浸泡，并置于超声波中震荡10～20min，用去离子水冲洗40～50min，在冲洗过程中用软毛刷轻轻洗刷所述外植体表面的污垢，然后用无菌滤纸吸干所述外植体外部的水分后切成5mm²的小块，得到所述无菌外植体；

所述两性表面活性剂为：20～25重量份的N-长链烷氧基羧酸型甜菜碱，15～18重量份的α-十六烷基三甲基甜菜碱，10～13重量份的N-烷基-β-亚氨基二丙酸，5～10重量份的十二烷基二甲基甜菜碱和60～70重量份的无菌水的混合溶液；

步骤二：利用诱导培养基培养所述无菌外植体，得到胚性愈伤组织，所述诱导培养基由MS、0.5～2.0mg/L的2,4-D生长素、1.0～1.5mg/L的木醋液、0.2～0.5mg/L的植物精油和6g/L的琼脂组成；

步骤三：利用第一增殖培养基培养所述胚性愈伤组织，继代培养2～3代，得到继代愈伤组织，所述第一增殖培养基由MS、0.5～2.0mg/L的2,4-D生长素、20～25mg/L的水苏糖和6g/L的琼脂组成；

步骤四：利用分化培养基培养所述继代愈伤组织，得到体胚，所述分化培养基由MS，0～1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤分裂素、0.5～2.0mg/L的萘乙酸和6g/L的琼脂组成；

步骤五：利用第二增殖培养基培养所述体胚，得到继代体胚，所述第二增殖培养基由MS、1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤分裂素、0.5～2.0mg/L的萘乙酸和2.0mg/L的2,4-D生长素组成；所述第二增殖培养基位于转速为120r/min的摇床中，且所述第二增殖培养基每隔3～5天更换一次培养基；

步骤六：利用植株再生培养基培养所述继代体胚，得到八角莲植株，所述植株再生培养基由MS、1.0～1.5mg/L的中药粉、1.0～1.4mg/L的赤霉素3，0.2～0.6mg/L的吲哚丁酸、0.3～0.7mg/L的海泡石粉和6g/L的琼脂组成；

所述中药粉的制作方法为：将重量份数为30～40份的八角莲、18～25份的风流果、23～28份的灵香草、15～17份的融安金桔和10～15份的白僵蚕混合后煎煮30～40min，过滤得中药渣，经高压灭菌后烘干，然后粉碎过200目筛网，即得所述中药粉；

其中，所述无菌外植体、所述胚性愈伤组织、所述继代愈伤组织和所述体胚在各自培养基中的培养条件均为：温度20℃～24℃，pH值5.6～6.0，暗培养15～20天，所述继代体胚在植株再生培养基中的培养条件为24～26℃，1000～2000Lux光照条件下培养至植株形成，其中光照时间为每天10h。

2.如权利要求1所述的八角莲的快速繁殖方法，其特征在于，还包括：

步骤七、将所述八角莲植株移至壮苗培养基中培养15～20天，得到八角莲幼苗，所述壮苗培养基包括促根培养基和促茎培养基，所述壮苗培养基放置于培养箱中，所述促茎培养基位于所述促根培养基的上方，从八角莲植株的下方开始，将八角莲植株的1/5浸没于所述促根培养基，将八角莲植株的1/3置于所述促茎培养基中；

所述促茎培养基由MS、1.0～1.5mg/L的所述中药粉、1.0～1.4mg/L的赤霉素3，0.2～0.6mg/L的吲哚丁酸、0.3～0.7mg/L的海泡石粉和6g/L的琼脂组成；

所述促根培养基由MS、10～15mg/L的柚子皮提取液、0.8～1.2mg/L的吲哚丁酸和1.0～1.5mg/L的木醋液组成；所述柚子皮的提取液的制作方法为：将柚子皮切碎，暴晒1～2天，然后放入沸水中煮沸30～40min，趁热过滤，并向热的滤液中加入柚子皮质量0.1倍的硼酸，将所述滤液真空减压浓缩至6mg/L，设置真空度为0.05～0.06MPa，减压浓缩时控制温度为55℃，即得所述柚子皮提取液；

步骤八、将所述八角莲幼苗移栽至基质中培养；

其中，所述培养箱包括上箱体和下箱体，所述上箱体与所述下箱体可拆卸连接，所述上箱体为上下贯通的筒体，所述上箱体的下平面设置有与其下平面尺寸一致的厚度为0.01～0.03毫米的聚乳酸薄膜，所述聚乳酸薄膜上开有多个通孔，一株所述八角莲植株穿过一个所述通孔；

所述下箱体为下部封闭上部敞开的筒体，所述下箱体外部套设有可拆卸的保温套，所述促茎培养基放置在所述聚乳酸薄膜上，所述促根培养基放置在所述下箱体内。

3.如权利要求2所述的八角莲的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤八中，所述八角莲幼苗移栽至基质中培养时，将所述八角莲幼苗连带所述促茎培养基和所述聚乳酸薄膜一起移栽至基质中，使得所述聚乳酸薄膜的下表面紧贴所述基质上表面，所述聚乳酸薄膜的上表面承载所述促茎培养基，所述八角莲幼苗在基质中培养8～10天后，将所述促茎培养基捣碎，调整所述八角莲幼苗在基质中的间距，使得每相邻的两个所述八角莲幼苗间距为30～35cm，继续培养至八角莲成熟；

所述基质从下到上由草原灰，壤土，珍珠岩，木屑，松针叶按重量比为1:8:2:4:3构成。