[发明专利]一种真核细胞III型启动子表达CRISPR sgRNA的方法及其应用在审
| 申请号： | 201510500937.X | 申请日： | 2015-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN105255937A | 公开（公告）日： | 2016-01-20 |
| 发明（设计）人： | 张智英;闫强;徐坤;邢佳妮;郭杨;任充华 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N15/85;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 刘震 |
| 地址： | 712100 陕西省咸*** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 真核细胞 iii 启动子 表达 crispr sgrna 方法 及其 应用 | ||
1.基于Drosha靶序列的特点和III型启动子实现CRISPR-Cas9系统sgRNA(又称gRNA)和/或RNA干扰shRNA(或miRNA)等多个小RNA共表达的方法，所述的方法通过III型启动子同时启动多个串联的sgRNA和/或shRNA表达，通过Drosha靶序列和细胞中RNA剪切机制实现多个功能性sgRNA和/或shRNA的表达并各自发挥作用。
2.权利要求1中提及的Drosha靶序列以及其优化和改进序列分别如SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示。
3.根据权利要求1所述的方法设计和构建的sgRNA1-shRNA1-sgRNA2-shRNA2-…shRNAn-sgRNAn多个小RNA表达盒或表达载体，其特征在于多个sgRNANA通过Drosha靶序列互相间隔串联，其中shRNA也可以是miRNA等其他形式的小发夹RNA。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其中所述的shRNA被miRNA或其他形式的小发夹RNA取代。
5.根据权利要求1所述的方法设计和构建的shRNA1-shRNA2-…shRNAn多小RNA表达盒或表达载体，其特征在于多个shRNA通过Drosha靶序列依次串联，其中shRNA也可以是miRNA等其他形式的小发夹RNA。
6.根据权利要求1所述的方法设计和构建的Promotor-sgRNA1-shRNA1-sgRNA2-shRNA2-…shRNAn-sgRNAn多个小RNA表达盒或表达载体，其中Promotor代表权利要求1中提及的III型启动子以及其他任何可用于该串联结构表达的启动子；其中shRNA也可以是miRNA等其他形式的小发夹RNA，优选得，所述的启动子为人U6启动子、鼠U6启动子、人H1启动子。
7.基于权利要求3~6所述的多个sgRNA和/或shRNA串联表达的任何形式及其在基因组打靶、编辑和基因表达调控中的应用。
8.权利要求7所述的应用范围为真核细胞或真核生物。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西北农林科技大学，未经西北农林科技大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510500937.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
