[发明专利]一种制备云南松树皮原花青素的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物提取物分离技术领域，具体涉及一种提取纯化云南松树皮原花青素的制备方法。

背景技术

我们知道，随着现代生活水平和质量的提高，人们的健康意识也日益增强，具有优良生理特性和功能的原花青素成为了人们关注的热点。因其具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗衰老、抗癌以及对心血管、心脏和视力的保护作用，原花青素作为重要的健康保健用品和治疗性药物，可用于改善血液循环、治疗糖尿病性视网膜病、减轻水肿和抑制静脉曲张等。与此同时，原花青素作为饲料添加剂在畜牧业中也发挥着重要的作用。既往研究表明，断奶仔猪腹泻主要是由于仔猪肠道黏膜屏障功能不全，在断奶时容易受到外来病原的入侵，引起肠黏膜氧化应激损伤进而造成氧化应激腹泻。理论上讲，如果能够找到一种高效的抗氧化剂，来缓解氧化应激造成的肠道屏障的损伤，将可以显著降低断奶应激所引起的腹泻，提高养猪业的生产效益。

原花青素是有着特殊分子结构的生物类黄酮，它由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成，是高效的辅助因子，是国际上公认的活性最强的天然抗氧化剂、清除自由基以及其抗衰老作用的物质。原花青素作为一种天然抗氧化剂，可以显著提高血液谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性，谷胱甘肽具有解毒的作用，对提高机体免疫反应有重要作用。原花青素有非常强的抗氧化效果，远远强于维生素C和维生素E，有实验证明，它的抗自由基的能力是维生素E的50倍，是维生素C的20倍，且现有研究未发现任何副作用；同时其抗过敏作用已引起科学界的高度重视，成为国际性的热门研究课题。原花青素广泛地存在于植物的根、茎、叶、皮、果实和种子中。而云南松树皮作为我国林业重要的富产物，尤其是在西南地区资源非常丰富，目前主要用于栲胶、粘胶剂和除锈剂等产品价值较低的化工产品，利用率低。云南松树皮中含有丰富的原花青素类化合物，是提取制备原花青素优秀的原料来源，同时因云南松树皮来源丰富、成本低廉，在显著降低原花青素的生产成本的同时，充分开发了云南松树皮的高附加值。

由于原花青素是极性分子，一般易溶于水和乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂中，因此，目前国内对原花青素的提取主要采用传统的有机溶剂浸提法，但该法存在提取时间长、产率低、产品稳定性差、有机溶剂用量及排量大、易污染环境等缺陷。现代制备过程中还会采用一些辅助的提取方法，如超声波提取、微波辅助提取和超滤法等。但采用手段比较单一，提取效率还是不足。

发明内容

本发明的目的为提供一种云南松树皮原花青素的制备方法。

本发明提供的制备云南松树皮原花青素的方法，包括如下步骤：

1)将云南松树皮粉碎后过筛，于溶剂中进行酶解辅助浸提，得到酶解液；

2)将步骤1)所得酶解液依次进行胶磨均质和高压脉冲电场处理，再将所得产物离心，收集上层清液，浓缩，得到原花青素的粗提液；

3)将步骤2)所得原花青素的粗提液纯化，干燥，得到所述云南松树皮原花青素。

上述方法步骤1)中，所用云南松树皮为产自中国云南省的松科松属植物的云南松(学名为PinusyunnanensisFranch)的树皮，云南松又名飞松、青松或长毛松；

过筛步骤中，筛孔的目数为20-80目，优选40-60目；

所述溶剂为水，粉碎后的云南松树皮与所述溶剂的料液比为1g：5-15mL，具体为1g：5mL、1g：10mL或1g：15mL。

酶解辅助浸提步骤中，所用酶选自酸性蛋白酶、纤维素酶和果胶酶中的至少一种，优选为果胶酶；

其中，所述酸性蛋白酶具体为胃蛋白酶，可购于美国Sigma公司，更具体可为美国Sigma公司出售的产品编号为77151的胃蛋白酶；

所述酸性蛋白酶的酶活为1200-2400U/mg，具体为1500U/mg；

所述酸性蛋白酶的酶活的定义如下：

在37℃和pH值3.0的条件下，1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸所需的酶量，即为1个酶活力单位；

所述纤维素酶，可购于美国Sigma公司，更具体可为美国Sigma公司出售的产品编号为22178的纤维素酶；

所述纤维素酶的酶活为0.3-1.0U/mg，具体为0.8U/mg；

所述纤维素酶的酶活的定义如下：

在37℃和pH值5.0的条件下，1min分解羧甲基纤维素产生1μmol葡萄糖所需的酶量，即为1个酶活力单位；

所述果胶酶，可购于美国Sigma公司，更具体可为美国Sigma公司出售的产品编号为17389的果胶酶；

所述果胶酶的酶活为0.5-5.0U/mg，具体为1.0U/mg；