[发明专利]褐斑大蠊分子标准样品及其制备方法

权利要求书

1.褐斑大蠊分子标准样品，其特征在于：采集褐斑大蠊成虫通过实验室条件饲养后，提取高纯度DNA，进行分装、冻干，得到褐斑大蠊的分子标准品，其具有下述的理化性质：（1）形状：纯白色粉末状；（2）每管的含量1μg±0.1μg；（3）DNA纯度：OD260/280=1.8-2.0；（4）易溶于水或Tris-EDTA缓冲液中。

2.根据权利要求1所述的褐斑大蠊分子标准样品，其特征在于：所述DNA纯度：OD260/280=1.85。

3.褐斑大蠊分子标准样品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

第一步为褐斑大蠊DNA提取：

野外采集褐斑大蠊成虫，通过实验室条件饲养，提取褐斑大蠊DNA；

第二步为核酸标准样品的制备：

将测定浓度后的DNA按1μg±0.1μg /管进行分装，每种核酸分子标样分装100管，然后冻干，冻干温度为-50℃，压强为2.66Pa，冻干所得即为目的标准品。

4.根据权利要求3所述的褐斑大蠊分子标准样品的制备方法，其特征在于：所述第一步中褐斑大蠊DNA提取的具体步骤为：

（1）动物组织裂解：

取2-25mg的动物组织置于2mL离心管中，用剪刀剪成碎块；

加入180μL的Buffer GL、20μL的蛋白酶K和10μL的浓度为10mg/mL的RNase A，于56℃水浴

中温浴2-3小时，至动物组织完全裂解，后12,000rpm离心2分钟，去除杂质；

（2）向裂解液中加入200μL Buffer GB 和200μL 无水乙醇，充分混匀；

（3）将试剂盒中的离心柱安置于收集管上，将上述操作（2）混合溶液移至离心柱中，12,000 rpm离

心2分钟，弃滤液；      

（4）将500μL的Buffer WA加入至离心柱中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液；

（5）在Buffer WB中加入56mL无水乙醇，混匀后，将700μL的Buffer WB加入至离心柱中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液；

（6）重复操作步骤（5）；

（7）将离心柱安置于原来的收集管上，12,000 rpm离心2分钟；

（8）将离心柱安置于新的1.5mL的离心管上，在离心柱膜的中央处加入50-200μL的灭菌水或洗脱缓冲液，室温静置5分钟；

（9）12,000 rpm离心2分钟洗脱DNA。

5.根据权利要求3或4所述的褐斑大蠊分子标准样品的制备方法，其特征在于：所述操作步骤（5）中沿离心柱的管壁四周加入Buffer WB。

6.根据权利要求3或4所述的褐斑大蠊分子标准样品的制备方法，其特征在于：所述步骤（8）中灭菌水或洗脱缓冲液加热至65℃。