[发明专利]一种提高脂肪源干细胞抗凋亡及旁分泌的方法

权利要求书

1.一种提高脂肪源干细胞抗凋亡及旁分泌的方法，其特征在于：3％低氧环境能促进脂肪源干细胞的抗凋亡及旁分泌能力。

2.根据权利要求1所述的提高脂肪源干细胞抗凋亡及旁分泌的方法，其特征在于：具体方法如下：

(1)剪除脂肪组织中明显的血管，用含有双抗的D-Hank’s清洗脂肪组织2-3次后剪碎，所述双抗为100U/ml青霉素和1g/ml链霉素；

(2)将剪碎的脂肪组织通过150目尼龙筛网过滤，收集150目滤网上的脂肪组织，用含有40U/50mlDNaseI和250μg/ml两性霉素的D-Hank’s液冲洗滤网上的脂肪组织，去掉分离组织时因破坏细胞而释放的DNA及其他胞内容物；

(3)将脂肪组织加入D-Hank’s液体，并以1500rpm离心5min，将上清转移至离心管中，加入含有0.5％胶原酶I的等体积D-Hank’s液，在37℃恒温振荡器上振荡约75min后，以1800rpm离心5min；

(4)弃上清，加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基，调整每个T₇₅cm²培养瓶中的细胞数约为2x10⁶，置入37℃，5％CO₂孵箱中培养，24小时后，将未贴壁的细胞移除；

(5)7-10天后瓶中细胞增殖并铺满瓶底，待融合率达到80％，以0.25％胰蛋白酶-0.01％EDTA消化，所得细胞为原代细胞，继续培养原代细胞，每3天换液1次，当细胞融合率达80％时，用0.25％胰蛋白酶消化、传代得到脂肪源干细胞，所用脂肪源干细胞为3-5代；

(6)培养脂肪干细胞24小时，使细胞融合达50％，更换培养基，调整氧浓度，3％O₂、5％CO₂、92％N₂，在上述氧浓度环境中培养24小时。