[发明专利]一种筛选天然产物中具有遗传毒性的成分的方法

权利要求书

1.一种检测天然产物中具有遗传毒性的成分的方法，其特征在于，包括步骤：

配制反应体系并进行温孵反应，所述反应体系包括：待测样本、脱氧核苷和同位素标记的脱氧核苷；

终止反应后，采用高效液相色谱-质谱联用法检测反应体系中DNA加合物的形成；其中包括，采用高效液相色谱-质谱联用法获取反应体系中各种物质的分子量；如果在质谱图中存在准分子离子相差为n的物质X和物质X’，n为脱氧核苷和同位素标记的脱氧核苷的分子量差值，则初步判定该物质X为可形成DNA加合物的成分。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)DNA加合物的初步筛选

配制反应体系，所述反应体系包括：待测样本、肝微粒体或肝S9、脱氧核苷、同位素标记的脱氧核苷和还原型辅酶Ⅱ；

将所述反应体系在37℃条件下孵育进行反应；

反应完成后加入等体积冰乙腈终止反应；

HPLC-MS/MS检测DNA加合物的形成。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤(2)：

(2)配制包括待测样本、肝微粒体或动物肝S9、小牛胸腺DNA和还原型辅酶Ⅱ的反应体系；将所述反应体系在37℃条件下孵育进行反应；反应完成后提取DNA；酶解或酸水解，固相萃取，HPLC-MS/MS检测DNA加合物的形成；

所述待测样本为步骤(1)检测获得的能够形成DNA加合物的物质。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的反应体系中，各组分的含量如下：

待测样本浓度≥20μg/ml；肝微粒体蛋白浓度≥0.1mg/ml；脱氧核苷含量≥20μg/ml；同位素标记的脱氧核苷含量≥20μg/ml；还原型辅酶Ⅱ或氧化型辅酶-Ⅱ含量0.5-2.0mmol/L。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的反应体系中，各组分的含量如下：

待测样本浓度≥20μg/ml；肝微粒体蛋白浓度≥0.1mg/ml；小牛胸腺DNA含量≥0.5mg/ml；还原型辅酶Ⅱ含量为1mmol/L。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述同位素选自：碳同位素、氮同位素、氧同位素、氢同位素或其组合；

优选地，所述脱氧核苷包括脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胞苷、脱氧胸苷及其三磷酸物。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述三磷酸物包括其金属盐。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样本为植物提取物。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述植物提取物为中药植物提取物。

10.一种使用权利要求1中的方法检测中药或提取物中有遗传毒性成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：肝微粒体或肝S9、脱氧核苷、同位素标记的脱氧核苷和还原型辅酶Ⅱ或氧化型辅酶Ⅱ及还原型辅酶Ⅱ再生系统所需试剂。