[发明专利]一种昆虫鞘翅石蜡切片方法

说明书

技术领域

本发明涉及显微组织切片技术领域，具体涉及一种昆虫鞘翅石蜡切片方法。

背景技术

鞘翅目昆虫的前翅一般认为已经全部骨化，只用于保护背部和后翅。现有对鞘翅目昆虫翅中神经细胞和神经系统的研究极弱并把这种情况归因于鞘翅的骨化。但实际情况是因为鞘翅的骨化而使鞘翅中分布的神经细胞难以观察而不是鞘翅中没有什么活的组织和细胞。

黄粉虫成虫具有角质化的鞘翅，幼虫棕黄色，喜食面粉，所以叫黄粉虫，又叫面包虫，学名Tenebrio molitor(L.)属鞘翅目，拟步行甲科，拟步甲属。黄粉虫为杂食性昆虫(黄粉虫的养殖以投喂麸皮、米糠为主，适当加喂鱼粉、豆饼粉、菜籽饼粉、各种菜叶等)，既是一种大型仓贮害虫，也是极具开发潜力的重要资源昆虫、更是一种可以在实验室饲养的重要的生理学实验材料。

最新的研究发现鞘翅表面具有感觉毛、鞘翅中具有活的神经，而神经细胞具有产生、传导和综合神经兴奋和神经信息的功能，对昆虫的活动有重要的作用。而感觉毛和神经细胞的研究需要对鞘翅切片进行解剖结构的研究；鞘翅中的微气管系统的研究也有待进行超微结构的分析。原有的石蜡切片方法，因为鞘翅质地的坚硬，石蜡渗透的效果很不好，使得鞘翅切片的破碎率极高，高于70％，不能满足观察鞘翅的内部显微和超微结构的要求，这也是目前对昆虫鞘翅研究薄弱的主要原因。

发明内容

基于以上不足之处，本发明的目的在于提供一种昆虫鞘翅石蜡切片方法，用于满足观察鞘翅的内部显微和超微结构的要求。

本发明所采用的技术如下：一种昆虫鞘翅石蜡切片方法，如下：

步骤(1)把鞘翅目昆虫在蛹期区分雌、雄，羽化后在36-48小时间取其鞘翅用于石蜡切片；

步骤(2)鞘翅固定：将步骤(1)所得到的鞘翅要观察的部分剪切好，用FAA固定剂固定24小时；

步骤(3)鞘翅脱水：把固定的鞘翅组织用不同体积浓度的酒精依次脱水，脱水浓度与时间依次为：50％1-2小时、70％1-2小时、80％30分钟、90％30分钟、纯酒精20分钟、纯酒精10分钟；

步骤(4)鞘翅透明：将脱水的鞘翅放入到按体积比，无水酒精∶二甲苯＝1∶1的液体中透明1-2小时，再放入二甲苯中1小时；

步骤(5)鞘翅浸蜡：将透明过的鞘翅放入55℃、已经融化的、按体积比，软石蜡∶二甲苯＝1∶1液体中3小时；再放入65℃已经融化的、按体积比，硬石蜡∶二甲苯＝1∶1液体中3小时；65℃恒温再过度浸蜡6小时；

步骤(6)包埋与切片：取出鞘翅，在伯口纸盒中凝固成型后切片；

步骤(7)展片、粘片与拷片；

步骤(8)脱蜡复水；

步骤(9)染色后封片。

采用本发明的方法处理后的昆虫鞘翅石蜡切片，破碎率很低，完整率高，达到90％以上的完整率，能够满足研究其显微和超微结构的要求。

具体实施方式

下面举例对本发明作进一步说明。

实施例1：

将饲养的黄粉虫，在蛹期分出雌、雄蛹，再把雌、雄蛹分别放置在饲养小盒内，待羽化后雌、雄成虫就自然分开了(因为黄粉虫成虫难以区分雌雄)。

取羽化后36-48小时的黄粉虫雌虫(或者雄虫，按研究的需要)的鞘翅放入FAA固定液中。一小时后取出，将要观察的部分剪切好后再放入FAA固定液中继续固定23小时。

把固定后的鞘翅组织用梯度酒精脱水。脱水酒精的起始体积浓度为50％，在不同浓度的酒精中脱水时间不完全相同。依次为：50％1-2小时、70％1-2小时、80％30分钟、90％30分钟、纯酒精20分钟、纯酒精10分钟。

将脱水后的黄粉虫鞘翅组织放入，按体积比为1∶1的无水酒精∶二甲苯的液体中透明1-2小时，再放入二甲苯中透明1小时。

将低熔点石蜡放置在小皿中，置于55℃恒温箱中融化，分批加入二甲苯，按体积比软石蜡∶二甲苯＝1∶1。将透明过的鞘翅放入，加盖静置3小时。再放入65℃已经融化的、按体积比硬石蜡∶二甲苯＝1∶1液中3小时；倒去1/2的石蜡液，再加入等量的石蜡液，65℃浸蜡2小时；再倒出1/2的石蜡液，再加入等量的石蜡液，浸蜡2小时；65℃纯石蜡液浸蜡2小时。

在伯口纸盒中凝固成型后切片。

此后的展片、粘片与拷片，脱蜡复水，染色后封片都是常规方法。

这样处理的黄粉虫鞘翅石蜡切片，破碎率很低，完整率很高，达到90％以上的完整率，能够满足研究其显微和超微结构的要求。