[发明专利]脂质体包裹的真核表达质粒pEGFP-IFNα及用途在审
| 申请号： | 201510506343.X | 申请日： | 2015-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN105200082A | 公开（公告）日： | 2015-12-30 |
| 发明（设计）人： | 袁雪梅;沈锦玉;姚嘉赟;潘晓艺;郝贵杰;蔺凌云;徐洋;林锋;尹文林 | 申请（专利权）人： | 浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A61K48/00;A61K9/127;A61P31/12 |
| 代理公司： | 湖州金卫知识产权代理事务所(普通合伙) 33232 | 代理人： | 裴金华 |
| 地址： | 313000 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脂质体 包裹 表达 质粒 pegfp ifn 用途 | ||
1.脂质体包裹的真核表达质粒pEGFP-IFNα，其特征在于它是通过以下方法制备的：
（1）、以草鱼RNA为模板，提取总RNA，用反转录试剂盒进行反转录和PCR扩增，制得扩增产物；
（2）、扩增产物纯化，然后再连接到T载体，制得连接产物；
（3）、连接产物转化至大肠杆菌DH5ɑ，获得克隆产物；
（4）、对克隆产物用XhoⅠ、HindⅢ进行双酶切，酶切产物回收IFNα片段，插入真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点，转化大肠杆菌DH5ɑ，然后抽提质粒进行酶切；得到重组质粒pET-IFNα；
（5）、卵磷脂和胆固醇溶于氯仿-乙醚中形成有机相，重组质粒pEGFP-IFNα用PBS稀释形成内水相，取内水相与有机相混合，以超声波细胞破碎机，乳化混合液，形成W/O型初乳；在搅拌下将初乳缓慢滴加入的吐温-80的水溶液中，再超声处理，得到复乳，除去有机溶剂，得到干扰素脂质体混悬液；
所述反转录试剂盒的引物如下：
pEGFP-IFNγ-U：CCCTCGAGatgaaaactcaaatgtggacgta
pEGFP-IFNγ-L：CCAAGCTTtcgtctgttggcaatgcttgc。
2.脂质体包裹真核表达质粒pEGFP-IFNα在鲤科鱼类的免疫保护方面的用途。
3.降低鲤科鱼类死亡率的方法，其特征在于：将权利要求1所述的脂质体包裹真核表达质粒pEGFP-IFNα注射于鲤科鱼类腹腔。
4.根据权利要求3所述的降低鲤科鱼类死亡率的方法，其特征在于：脂质体包裹真核表达质粒pEGFP-IFNα的注射量为0.5～10μg/g鱼体重。
5.根据权利要求3所述的降低鲤科鱼类死亡率的方法，其特征在于：脂质体包裹真核表达质粒pEGFP-IFNα的注射量为0.5～5μg/g鱼体重。
6.根据权利要求3所述的降低鲤科鱼类死亡率的方法，其特征在于：脂质体包裹真核表达质粒pEGFP-IFNα的注射量为1～3μg/g鱼体重。
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