[发明专利]儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性荧光探针及其应用

权利要求书

1.一种儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性荧光探针在非疾病诊断和治疗方法方面的应用，其特征在于采用该探针底物作为COMT的特异性底物进行8-O-甲基化结合反应，通过定量检测单位时间内的8-O-甲基化产物的生成率来定量测定不同生物体系中COMT的活性，其反应式如下：

2.如权利要求1所述的一种儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性荧光探针在非疾病诊断和治疗方法方面的应用，其特征在于所述定量测定不同生物体系中COMT的活性的方法，具体操作按照以下步骤进行：

a.将待测样品加入pH 7.4的浓度为0.1M Tris-HCl缓冲液中；

b.混匀后加入浓度为100mM的镁离子，浓度为4mM甲基供体S-腺苷甲硫氨酸以及40mM二硫苏糖醇；

c.37℃混匀后，孵育3-5min，加入1mM 3-BTD溶液；

d.37℃下反应一定时间后，加入乙腈终止反应，离心，取上清液于酶标仪或生化仪上检测底物及目标产物的荧光值；

e.绘制产物3-BTMD的标准曲线，以3-BTMD的荧光值对其浓度作图，计算回归方程y＝a*x+b；将待测样本的荧光值代入标曲换算得到COMT酶的活性。

3.如权利要求2所述的一种儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性荧光探针在非疾病诊断和治疗方法方面的应用，其特征还在于其通过定量检测单位时间内的3-BTMD的生成率来定量测定不同生物体系中COMT的活性；其测定条件如下：孵育体系中探针底物的浓度介于1/10～10Km之间，孵育体系的pH在6.5～10.5之间；反应温度介于20～60℃之间；反应时间5～120min。

4.如权利要求1所述的一种儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性荧光探针在非疾病诊断和治疗方法方面的应用，其特征还在于：其甲基化产物的定量检测可借助荧光检测器快速检测，检测条件：激发波长390nm，最大发射波长为520nm。

5.如权利要求1所述的一种儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性荧光探针在非疾病诊断和治疗方法方面的应用，其特征还在于所述生物体系为含有COMT酶或其突变体的各类体外生物样品；包括重组表达COMT单酶、动物或人源细胞、动物或人源组织制备物。

6.如权利要求1所述的一种儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性荧光探针在非疾病诊断和治疗方法方面的应用，其特征在于定量测定生物样品中COMT酶活性方法，可用于COMT酶诱导剂或激活剂的筛选及抑制或诱导能力的定量评价。