[发明专利]热休克蛋白基因启动子和四环素基因启动子控制的多基因表达和沉默系统有效
| 申请号： | 201510514331.1 | 申请日： | 2015-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN105018528B | 公开（公告）日： | 2018-04-03 |
| 发明（设计）人： | 唐丽灵;李顺;廖意;徐晓莉;陈影;徐锡超 | 申请（专利权）人： | 重庆大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/113;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400044 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 休克 蛋白 基因 启动子 四环素 控制 多基因 表达 沉默 系统 | ||
1.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括HSP70基因启动子、四环素基因启动子、由HSP70基因启动子启动表达的绿色荧光蛋白基因和由四环素基因启动子启动表达的Turbo RFP基因，由以下方法制备：
用ClaI和XhoI酶37℃水浴酶切SEQ ID NO.3所示HSP70基因启动子序列和pTRIPZ 载体各5min，回收酶切后的HSP70 基因启动子片段以及载体骨架片段，并将回收后的HSP70 基因启动子片段连接至酶切后的pTRIPZ 质粒骨架片段，16℃连接1h，4℃孵育12h后将连接产物转化至Stbl3感受态细胞，AMP+抗性平板涂板，倒置培养14h，菌落PCR鉴定，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，对阳性菌落扩大培养14h，进行质粒提取，经测序鉴定得到pTRIPZ -HSP70P载体；
用XhoI和MluI37℃水浴酶切SEQ ID NO.6所示绿色荧光蛋白基因序列和pTRIPZ -HSP70P载体各10min，回收酶切后的EGFP片段以及载体骨架片段，将回收后的EGFP基因片段连接至酶切后的pTRIPZ -HSP70P质粒骨架片段，16℃连接1h，4℃孵育12h，然后将连接产物转化至Stbl3感受态细胞，AMP+抗性平板涂板，倒置培养14h，对单菌落进行菌落PCR鉴定，并将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，对阳性菌落扩大培养 14h，提取质粒，经测序鉴定得到pTRIPZ -HSP70P-EGFP载体。
2.权利要求1所述重组载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：用ClaI和XhoI酶37℃水浴酶切SEQ ID NO.3所示HSP70基因启动子序列和pTRIPZ 载体各5min，回收酶切后的HSP70 基因启动子片段以及载体骨架片段，并将回收后的HSP70 基因启动子片段连接至酶切后的pTRIPZ 质粒骨架片段，16℃连接1h，4℃孵育12h后将连接产物转化至Stbl3感受态细胞，AMP+抗性平板涂板，倒置培养14h，菌落PCR鉴定，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，对阳性菌落扩大培养14h，进行质粒提取，经测序鉴定得到pTRIPZ -HSP70P载体；
用XhoI和MluI37℃水浴酶切SEQ ID NO.6所示绿色荧光蛋白（EGFP）基因序列和pTRIPZ -HSP70P载体各10min，回收酶切后的EGFP片段以及载体骨架片段，将回收后的EGFP基因片段连接至酶切后的pTRIPZ -HSP70P质粒骨架片段，16℃连接1h，4℃孵育12h，然后将连接产物转化至Stbl3感受态细胞，AMP+抗性平板涂板，倒置培养14h，对单菌落进行菌落PCR鉴定，并将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，对阳性菌落扩大培养 14h，提取质粒，经测序鉴定得到pTRIPZ -HSP70P-EGFP载体。
3.权利要求1所述的重组载体在调控下游基因或shRNA表达中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于重庆大学，未经重庆大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510514331.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
